[Western Blot] 웨스턴 블롯 전반적인 과정 설명 : 기본편
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- Опубликовано: 19 янв 2022
- 웨스턴 블롯 (Western blot) 실험의 전반적인 과정을 담아보았습니다 !
추후에 각 step 별 세부 설명 영상 (심화편)을 편집하여 올려보겠습니다 ~
궁금하신 부분은 댓글 남겨주세요 !
Music ~ ♬
-Artist : Oneul
-Link 1 : • Oneul - Winter vacatio...
-Link 2 : • 사랑한다고 말했다 (I Love You)...
-Link 3 : • 초콜렛 세상 (Chocolate Worl...
Music 
Наука
![Western Blot - Semi-Dry transfer [Video from GeneTex]](http://i.ytimg.com/vi/krFKPwhiHJE/mqdefault.jpg)
![[New Western blot 2/6] 단백질용 젤 만들기(Polyacrylamide gel)](/img/1.gif)
와 최고에요! 도움이 많이됐습니다
시청해주셔서 감사합니다 ~~ ♥
너무 유용해요...ㅠㅠ 덕분에 수업 때 못 알아들었던 거 잘 배우고가요...!
시청해주셔서 감사합니다 ! ♥
심화편 기다리고 있어요 좋은 영상 감사합니다~~
현생에 지쳐 살다보니 ,,, 너무 늦네요 ,,, 분발할게요 ! 시청해주셔서 감사합니다 ㅎㅎㅎ ♥
역시 실험영상 올리니 삽시간에 브릭 Q&A가 되어 버리네 ㄷ ㄷ
wow your blots look great! ♥️ i am trying to troubleshoot mine, i have smeared bands 🧍🏻♀️
심화편 영상 보고싶어요!! 영상이 너무 유익하고 재밌습니다
도움이 되었다니 정말 다행이예요 ! 시청해주셔서 감사합니다 ㅎㅎㅎ ♥
Hi, i'm from Brazil !
I'm having some difficulties with the transfer!
How many millimeters is your gel?
Here for 1.0M gel, semi-dry transfer was carried out at 24v for 15 minutes.
I tried this for 1.5M gel, but it didn't transfer at all.
I saw that you use 25v for 1 hour, what percentage and millimeter of gel is that for?
I tried to see in the video, I think your gel was 1.5M, but I'm not sure...
I also have to transfer high proteins like 250 kDa, i don't know if 25v por 1 hour helps...
If you can help me... I would be very happy.
Thanks
구독 꾹!
감사합니다 !!!!
1:19 부분에서 1X Running Buffer 넣은 후에 몇 분 정도 기다리시다가 Plastic Combo를 빼신건지 알려주실수 있으신가요? 영상 보는데 너무 유익하게 잘 보고 있습니다!
❤️❤️❤️❤️☺️👍👍👍👍👍👍
알고리즘에 홀려왔는데 몰캉몰캉 천지같네…
사이즈가 다른 단백질에 경우 membrane을 자르고 한번에 detection하는건 좋아보여요! ㅋㅋ
넵 ! 처음 배울 때 그렇게 배워서 편리했던 것 같아요 ㅎㅎㅎㅎ!
8:08에 나오는 membrane 두는 비닐은 어떤건가요??
영상 잘 봤습니다! 혹시 protein sample 만들고 냉동보관 후 녹이고서도 boiling이 필요한가요? 초짜라서요 ㅠㅠㅠㅠ
저는 Loading protein (protein sample)을 만들 때 처음 boiling (90℃, 5m)하고 -20℃에서 냉동보관하다가 사용하기 전에 한 번 더 boiling (90℃, 5m) 해서 사용하고 있습니다 !!
플라스틱통 진짜 최고네요ㅋㅋㅋ 보통 저 통에는 안티바디 몇ml씩 넣으시나요? 처음에 트랜스퍼버퍼만큼 10ml 들어가나요??
멤브레인을 잘라서 사용하는 경우에는 저 플라스틱 통이 짱이에여 !! 총 볼륨 10 mL을 사용하고 있습니다 ㅎㅎㅎ
안녕하세요. 이번에 western blot 진행하면서 굉장히 고난을 겪고있는데요,,결과적으로 band가 나오지않습니다 ㅜㅜ 가능하시다면 disscusion좀 부탁드리고싶어서요... ㅠㅠ
Hi, I'm from Vietnam. Could you share us the brand of the filter paper you used, please?
My labor used many types of paper, but they are not appropriate.
Hope to hear from you soon.
Thank you for watching my vedio !
I wrote down the brand name below.
BIO RAD : Extra thick blot paper Fiter paper (Catalog# 1703966)
I hope for your successful experiment!
@@hyejulee7072 thank you, have a nice day
你好我来自中国，能询问一下你裁膜用的工具
是什么吗？
how to detect protein marker i am just getting band only no protein marker till 10 min exposure?
Did you check the detection condition of chemiDoc ?
@@hyejulee7072 i ran using chemidoc xrs system using chemiluminescense option, here i can only see band of my protein but the marker is absent
겔들의 농도가 5%, 10% 등 다양하던데 무슨 기준으로 농도를 다르게 하나요?
아크릴아마이드 비율이 높을 수록 촘촘한 포어가 만들어진다고 생각하몀 됩니다 !!
유익한 영상감사합니다! 혹시 트랜스퍼 끝나고 멤브레인 자르실때 쓰신 비닐은 어떤제품인가요? ㅠㅠ
일반 투명 파일 (?) 리필용 비닐을 사서 잘라서 쓰고 있습니다 !! 가격도 저렴해서 괜찮더라구요 !
감사합니다!! ㅎㅎ
3:10
7:44
안녕하세요! 혹시 gel %는 어떻게 되는지 여쭤봐도 될까요?? 저도 곧 실험에 들어가는데 선생님께서 이 영상에서 사용하신 inos cox-2를 볼 것 같아서요! Inos 사이즈가 100이 넘어가서 10%gel로 안 보일까 걱정입니다 ㅠㅠ
저는 8% separate gel 을 사용했습니다 !!!!! 8% 기준으로 해봤을 때 inos도 잘 보이더라구요 ㅎㅎㅎ !!
@@hyejulee7072 헉!! 이렇게 빨리 알려주시다니 ㅠㅠ 감사합니다!! 저도 8%로 한 번 해 보겠습니다!! 🥰
그리고 혹시 마지막 detection할 때 밴드를 하나하나씩 보는 이유도 있을까요? Inos, cox-2, b-actin 한꺼번에 넣고 찍으면 잘 안 나올까요..? ㅠㅠ
주말에 쉬시는데 연속으로 질문드려서 죄송합니다아.. 😭
@@user-bx2xi3rj7z저희 랩은 @@user-bx2xi3rj7z을 잘라서 사용하고 있어요 ! Cox2 / inos / b-actin 세 가지 단백질 크기가 다 다르기 때문에 그냥 잘라서 봅니당 !
만약 단백질 크기(kDa)가 같은 경우에는 하나를 먼저 붙여서 보고 scraper buffer 벗겨서 다른 걸 붙여서 보고 이렇게 해요 !!
@@hyejulee7072 아 그그 제가 설명이 부족했나봐요. 영상에서 8:50 이 쯤에 기계로 찍는데 한 개씩 넣고 찍으시는데 이유가 있는지 궁금해서요!! 한꺼번에 넣고 찍으면 잘 안나온다거나...? 하는...
계속 질문드려서 죄송합니다아 ㅠㅠ
혹시 트랜스퍼 할때 밀대..?같은건 어디서 살수 있나요 퓨ㅠㅠㅠ 기포때문에 넘 스트레스 받아여.. 영상 감사합니다!!
교수님께서 구입하셨던 거라 정보를 모르겠네요 ㅠㅠㅠㅠㅠ 제가 여쭤보고 대댓글 달게요 !!!!
저희는 플라스틱 15ml 피펫 가운데부분 잘라서 씁니다..ㅋㅋ
@@hyejulee7072 뭔지 알 수 있나요 ㅠ
1:34
2:04
혹시 filter paper 는 브랜드랑 이름이 뭔지 알려주실 수 있을까요? 두꺼워서 좋아보여요!
BIO RAD : Extra thick blot paper Fiter paper (Catalog# 1703966) 입니다 !!
알려주셔서 감사합니다!!! 🥰
6:00 오비탈 쉐이커가 냉장고에 어떻게 들어가요? 유선인데??? 궁금합니다
저희 랩실은 유선으로 꼽고 냉장고 문을 의자로 안열리게 받쳐놔요 ㅋㅋㅋㅋ
안녕하세요 제가 이번에 웨스턴 블롯을 처음 하려고하는데 혹시 전체 protocol을 볼수있는곳이 있을까요?
구글에 western blot protocol을 검색하면 여러 가지가 뜨는데 거기서 잘 골라서 사용하면 될 듯 해요 ! 아무래도 랩실마다 protocol 이 다 달라서요 ㅠㅠ 그래도 전반적인 과정은 거의 비슷하게 진행돼요 !
@@hyejulee7072 감사합니다 !
Move forward🫶🏻🫶🏻❤️
안녕하세요. 멤브레인 자를때 사용하는 필름지는 어떤제품인가요?
A4 파일에 끼워서 사용하는 리필용 비닐 (?) 입니다 ! 다이소에서 구매했어요 !
답변감사합니다!! 한가지 더 여쭤볼게 있는데 트렌스퍼기계 정보 알 수 있을까요?
Bio-Rad semi dry transfer 기계 입니다 !
영상 및 블로그 정말 유용하게 참고하고 있습니다~!
혹시 blocking, washing 하실 때 나오는 저 플라스틱통은 어디서
구매하신건지..... ㅋㅋㅋ너무 편해보이네요
다이소에서 구매했습니다 ! 가격은 1,000원으로 저렴했던 걸로 기억해요 ㅎㅎㅎ !
웨스턴은 러닝젤, 스타킹 젤이 있다는데 러닝젤의 조성은 뭐고, 어떻게 만드나요?
구글에 "western blot gel 조성" 이라고 검색하면 표가 나옵니다 ! Gel 만드는 방법도 다음에 기회가 된다면 영상으로 담아볼게요 !!
겔은 아에만들어서쓰시는건가요??
넵 !! 직접 만들어서 사용합니다 !
western blot이랑 sds-page랑 같은건가요?
SDS-PAGE는 Western blot 의 과정 중 하나입니다 ㅎㅎ 제일 첫 단계로 단백질을 크기 별로 분리해주는 작업이예요 !
염증 보시나 봅니다 ㅎ
넵 ㅎㅎㅎ 이 시기에는 Raw 264.7 cell 로 항염증 실험했었습니다 !