[A13] Western Blot Part.2 (SDS-PAGE & Transfer) 이론편
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- Опубликовано: 9 сен 2024
- 바이오 연구실에서 가장 많이 활용되는 단백질 분석 실험법
Western Blot assay !
많이 기다리셨죠!? 드디어 Western blot 2편이 업로드 되었습니다!
(저희가 이거 말고 원래 해야하는 업무가 있다보니 제작이 지연되는 점 양해 부탁 드려요...
최대한 열심히 만들어 보겠습니다!!!)
이번 편에서는 Western blot의 핵심!!!
SDS-PAGE와 Transfer 단계에 대해 알아보겠습니다. :)
총 3편 중, 2번째 영상이구요.
마지막 3편은 늦지 않도록 빠르게 제작해볼게요!!!
조금만 기다려주세요!! ^___^
#Westernblot #Molecularwork #단백질전기영동 #정성시험법 #기초분자생물학 #SDSPAGE #Transfer #단백질정성 #Protein #Western #단백질실험 #Westernblotassay
![[A12] Western Blot Part.1 (개념 및 샘플 준비 방법) 이론편](http://i.ytimg.com/vi/H4boJZj7U6E/mqdefault.jpg)
![[A12] Western Blot Part.1 (개념 및 샘플 준비 방법) 이론편](/img/tr.png)
![[A09] 실시간 중합효소 연쇄반응(qPCR)에 대해 알아볼께요!](http://i.ytimg.com/vi/QWxRjZpI4oI/mqdefault.jpg)
00:23 SDS-PAGE 정의
02:03 Protein Ladder(Marker)란?
02:50 Polyacrylamide Gel (Stacking gel / Running gel)이 구분되어 있는 이유
05:43 SDS-PAGE 실험 과정
06:19 Transfer 정의
07:00 Transfer용 Membrane의 종류와 특징
08:12 Transfer 실험 과정
*Cytiva Amersham™ 전기영동장치 안내 : www.seoulin.co.kr/intro/cytiva-amersham-western-blotting-workflow-electrophoresis-%ec%a0%9c%ed%92%88-%ec%86%8c%ea%b0%9c/
*Cytiva Amersham™ Protein marker 제품 젖ㅇ보 : www.seoulin.co.kr/intro/cytiva-amersham-western-blotting-workflow-electrophoresis-%ec%a0%9c%ed%92%88-%ec%86%8c%ea%b0%9c/
*Cytiva Amersham™ Transfer membrane 제품 정보 : www.seoulin.co.kr/intro/cytiva-amersham-western-blotting-workflow-transfer-%ea%b4%80%eb%a0%a8-%ec%a0%9c%ed%92%88-%ec%86%8c%ea%b0%9c/
*바이오세상 SDS-PAGE/Transfer 관련 Buffer 제품 정보 : www.seoulin.co.kr/intro/western-blot-%ea%b4%80%eb%a0%a8-%eb%b0%94%ec%9d%b4%ec%98%a4%ec%84%b8%ec%83%81-%ec%8b%9c%ec%95%bd/
여기 콘텐츠는 항상 감동입니다. 전문성과 쉬운 설명 넘 감사해요!
헉...ㅜㅜ 감사합니다.........ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
와 2탄 너무 기다렸어요ㅜㅜ 감사합니다!!
3편 기다릴게욤
와! 드디어! 너무 잘 보고 있습니다 :)
너무 좋은 영상이에요! 다음 영상이 기대하겠습니다.
진짜 최고에요
이번 기말 시험범위인데 정말 너무 도움됬어요.
정말 감사합니다!!!
넘 잘 보고 있습니당! 혹시 3편은 언제 올라올까요?!?! ㅠㅠ
너무 잘 봤습니다! 감사합니다!!!
안녕하세요! 너무 이해하기 쉽고 잘 설명해주셔서 감사합니다
궁금한 점이 있는데 혹시 PVDF membrane에서 단백질이 PVDF에 결합할 때 hydrophobic property 에 의해 결합한다고 하셨잖아요.
단백질과 membrane의 소수성 interaction을 위해서는 membrane이 소수성인 상태로 놔둬야 할 것 같은데
왜 굳이 친수성으로 만들기 위해 메탄올로 pre-wetting해 주는 것인가요?
일단 단백질이 붙어야 소수성 interaction이든 뭐든 할 수 있는 것이기 때문인가요?
화학에 무지해서 질문드립니다....ㅠㅠ
항상 도움 많이 받고 있어요 생명과학 원리 설명은 여기가 최고인 것 같아요 감사합니다!
PVDF membrane은 Hydrophobic한 성질이 있어 물이나 Buffer와의 수용력이 거의 없고,
때문에 그냥 사용하게 되면 단백질과의 Binding capacity가 떨어집니다. 하여 Methanol을 사용하여 소수성 성질을 없애고 사용하게 됩니다. :)
요즘 진짜 도움 많이 받고 있어요! 혹시 lac operon관련해서 영상 만들어주실 수 있나요?!
기획된 컨텐츠들 제작이 끝나면 검토해보도록 하겠습니다. :)
안녕하세요! 좋은 영상 너무 감사합니다. 덕분에 쉽게 공부하고 있습니다.
질문이 한 가지 있는데요, 4:30 에서 설명해주신 "염소 이온과 Glycine 사이에서 강한 전류가 흘러 단백질들이 분자량과 관계 없이 움직이는 속도가 비슷해진다" 라는 부분이 잘 이해가 안되어서요. 강한 전류가 흐르는 것과 분자량에 상관 없이 단백질의 이동 속도가 비슷해지는건 어떤 상관관계가 있는 건가요?
안녕하세요. :)
강한 전류가 흐르는 곳에서는 단백질의 크기나 여러 물리적 성질과 관계 없이 전류의 힘에 의해서만 단백질이 이동하게 됩니다. 그렇기 때문에 크기와 상관 없이 모든 단백질들의 속도가 같아져 동일선상에 있게 되는거죠!
Gel만드는 과정에서 Acrylamide들로 Polymerization 시킬때 너무 빨리 시키거나 너무 오래 시간끌어 만들때의 문제점이 무엇인가요..?
Gel을 만든 후 너무 빨리 Running에 사용하게 되면, Gel 성분들이 채 굳지 않은 상태로 진행될 수 있습니다. 이렇게 되면 전기영동 시 gel이 어그러질 수 있기 때문에 충분한 시간 굳힌 뒤 사용해주시는 것이 좋습니다. 반대로 너무 방치한 뒤 사용하게 되면, Gel 내 수분들이 빠져나가 원하는 percentage의 gel 상태를 유지할 수 없고, gel 내 구조도 헝크러질 수 있습니다.
Gel을 굳히는데에 정해진 시간은 없지만 일반적으로 gel 제작 후 약 1-2시간 정도 굳힌 뒤 전기영동을 진행합니다.
인형모자 머리 안무겁나요
생각보다 엄청 가볍답니다~! :)