Видео

@@32412 연세대학교 면역및조직병리학 연구실입니다. 혹시 무슨 일 때문이신지 여쭤봐도 될까요...?

@@서교원-r5g 네, 가능합니다. 하지만 추천 드리진 않습니다! CO2 없이 HEPES로만 버티려면 세포에 좋지 않을 정도로 HEPES를 고농도 투입해야 합니다. CO2에 비해 효율이 좋지 않죠. 그리고 투입하는 시약의 종류(종속 조건)가 적어질수록 실험의 변수가 줄어들기 때문에, 더욱 정확한 실험이 가능합니다. 한마디로 CO2를 쓰고, HEPES의 농도를 줄이는게 정확하고 맘 편합니다. ㅎㅎ ☺️

@@서교원-r5g 이미 pH가 맞춰진 맞춤제작 배지인데다가, pH를 조정하는 여러 buffering reagent가 들어가있어서 괜찮습니다! 만약 파우더 형태의 배지를 직접 제조해서 사용하신다면, 여과멸균하기 전에 pH를 맞춰주는 작업을 꼭 해주셔야 합니다!

@@User-gm3ec 감사합니다 ㅠㅠ 너무 과분한 칭찬이세요 🥹🫶 아직 부족하지만 더 정진해보겠습니다. 선생님께서는 분명 저보다 나은 대학원생이 되실 겁니다. 응원합니다 🥰

@@두루미-d4c 헙...일단 이건 제가 개인적으로 파이펫이랑 액화질소를 산 다음, 집에서 해야할것 같아요 🥹 돈 영끌해보겠습니다 ㅎ,.ㅎ

@@aunge9715 안녕하세요, 연구원님! 질문 주신 사항에 대해 답변 드리겠습니다. 1. 밴드가 아령 모양으로 되는 것은 여러 가지 이유가 있겠으나, 보통은 단백질 농도, 젤 로딩, 전기영동 조건에 문제가 있는 경우입니다. - 단백질 농도는 높은데 로딩하는 부피는 적은 경우, 양옆으로 몰리는 현상이 생깁니다. 저는 보통 1~2 ug/uL의 농도로 10 uL 이상 loading 하는 편입니다. - 전압이 너무 높을 경우, 또는 젤이나 버퍼가 과열됐을 때 나오기도 합니다. 100 V가 적당한 전압입니다. 바이오 래드 사에서는 200 V를 권장하지만, voltage를 반으로 낮추고 시간을 2배로 늘리는게 단백질에겐 좀 더 안정적입니다. 그리고 버퍼를 차갑게 만들어서 쓰시는게 좋구요. :) - 젤에 로딩하는 양이 너무 적으면 양옆으로 퍼지기도 합니다. 10-20 uL 정도를 로딩하시되, 천천히 주입해서 마치 바닥에 켜켜히 쌓이는 느낌으로 로딩해보세요. 훨씬 밴드가 이쁘게 나올 겁니다. - Stacking gel을 다 만드신 후에 well 내부에 남아있는 젤 찌꺼기를 잘 청소해주세요. 중간 부분에 젤 찌꺼기가 남아있으면 단백질을 양쪽으로 잘 퍼지게 만듭니다. 2. 멤브레인에 검은 점들이 보이는 건 보통 오래된 membrane, 부족한 blocking이나 높은 항체 농도에 의해 자주 생깁니다. 저도 간혹 오래된 membrane을 사용하면 까만 점이 나오는 걸 볼 수 있는데요. Membrane이 눌리거나 습기에 망가지면서 그 부분에 전기영동 중 단백질이 뭉쳐 막히는 거죠. Membrane을 한번에 많이 잘라놓고 사용하는 것 보다, 10~30장 정도 잘라서 항상 fresh하게 사용하시는 걸 추천 드려요. 그리고 blocking하실 때 skim milk의 종류, 농도와 처리 시간은 어떻게 되시나요? Skim milk도 western blot 용, 세균 배지용 등 종류가 다양합니다. WB용은 훨씬 입자가 고와서 버퍼에 잘 녹습니다. 저는 PBS 또는 TBS에 5%가 되도록 녹여서 사용합니다. RT에서 30-60 min, rocking하시는 걸 추천드립니다. 요즘처럼 추운 날씨에는 blocking이 좀 덜 될 수 있으니 따뜻한 연구실 내에서 하시는걸 추천드려요. :) 그리고 항체의 농도가 너무 높거나, ECL solution을 과하게 사용할때도 비슷한 문제가 생길 수 있습니다. 1차 항체 또는 2차 항체의 농도를 1:1,000~1:10,000으로 다양하게 처리해보신 다음, 몇 ug/mL의 농도로 처리해야 깔끔하게 나오는지 확인해보세요. 다음 WB부터는 해당 농도로만 걸어주면 문제 없습니다. ECL solution에 감광하신 후에는 휴지로 가볍게 여액을 흡수시켜 주시면 검은점(과포화 신호)을 없애실 수 있으실 거에요. ☺️ 이 외에도 궁금하신 점이 있으시면 redberry1245@naver.com으로 메일 주세요. 성심껏 도와드리겠습니다. 영상 봐주셔서 감사드리고, 좋은 밤 보내세요! 🙆🫶

@ThisIsGraduateStudent 친절하고 자세하게 설명해주셔서 감사합니다! 정말 잘 보고 있어요! 감기 조심하시고 건강하세요!!

@@aunge9715 ㅎㅎ 감사합니다 🥹🫰

@@urizipcrab 감사합니다...ㅎㅎ🫶 지렁이님 오랜만이에요 😆 좋은 밤 보내세요!! 🥰🥰

@@Chibidana Oh, thank you so much 🥰 I still need to do much harder. If you need some help, please let me know. Have a good day 🙆

@@낮잠자는징징이 감사합니다. 도움이 되셨다니 너무 다행입니다. ㅎㅎ 좋은 하루 되세요 😊

@@sansuyoo 안녕하세요 :) 농업인으로서 재배와 배양에도 많은 시간을 쏟으실텐데, 세균 배양에도 적극적이신게 참 놀랍습니다. 대단하신것 같아요 👍👍 세균을 관찰하는데는 보통 400~1000배를 많이 씁니다. 너무 비싼 현미경을 사용할 필요는 없고 50~150만원 선에서 충분히 해결 가능합니다. Olympus CX23 같은 현미경을 추천드립니다. 저희 대학교에서 실습때 사용하는 현미경 모델입니다. 그리고 현미경과 함께 slide glass, cover glass, disposable loop, immersion oil도 구매하셔야 합니다. 현미경에서 관찰하려면 샘플을 프레파라트 형태(슬라이드 위에 얇게 제물을 올리는 것)로 만들어야 하는데, 슬라이드와 커버글라스가 쓰이죠. 그리고 1000배에서 관찰하려면, immersion oil이 있어야 뚜렷한 상이 관찰 가능합니다. Disposable loop는 일회용 백금이인데, 세균을 슬라이드에 얇게 펼때도 쓰이고 배양할때도 많이 쓰입니다. 대물렌즈 옆에 쓰인 글자들은 브랜드마다 조금씩 차이는 있지만, 아래 댓글에서 대표 양식으로 설명 드리겠습니다.

@@sansuyoo U PL(Plan) XAPO 100X O PH 대물렌즈 옆에 이렇게 써있다면, 앞에서부터 해석해보겠습니다. 1) U 또는 L이 쓰여있는데, U는 universal 범용적으로 관찰 가능함을 의미하고 L은 long working distance로 물리적으로 긴 작동 거리를 의미합니다. 보통 짜리몽땅한 U 렌즈를 많이 씁니다. 2) PL은 이미지가 얼마나 평탄하게 굴곡 없이 찍히는지를 의미합니다. 커브드 또는 광각으로 이미지가 왜곡이 있는 대신 더 넓은 상을 찍을 수 있게 해주는 렌즈도 있습니다. 3) FL, ACH, APO, SAPO, XAPO 등은 색수차 보정 수준을 의미하는데, 이건 한번 찾아보심을 추천드립니다. 렌즈에 의해 왜곡되는 색 차이를 어떻게 보정하는가 차이입니다. 4) 100X는 배율을 의미합니다. 주로 1.25X부터 150X가 있습니다. 5) O 또는 W는 oil, water를 의미합니다. Oil은 이멀젼 오일, water는 증류수를 사용하시면 됩니다. 이건 고배율의 렌즈에서 주로 보이며, 빛이 퍼지는 걸 막아주는 역할을 합니다. 아무것도 안 적혀있으면 그냥 관찰하시면 됩니다. 6) 아무것도 안적혀있거나 PH가 적혀있습니다. 아무것도 안적혀있으면 bright field 명시야 관찰(일반적인 방식)이고, PH는 phase contrast 위상차 관찰 방식입니다. 위상차 관찰 방식은 빛의 굴절을 통해 관찰하므로, 투명한 샘플을 염색 없이 관찰할 수 있다는 장점이 있습니다.

@@bsunny851 안녕하세요~ 저도 가끔 알콜솜으로 소독하신 후 다시 리터치하셨다가 채혈하시는 선생님들 많이 보긴 합니다. 물론 좋은 습관은 아니긴 합니다. 하지만, 손끝에 묻어나온 세균, 바이러스가 주사 바늘을 타고 들어가 감염을 일으킬 확률은 "매우 적다"라고 말씀드릴 수 있겠습니다. 우선 감염을 일으키려면 어느 정도 그 세균 또는 바이러스의 수가 많아야 가능한건데, 손끝에 있는 양으로 감염되려면 실험실에서 잔뜩 배양한 세균이나 바이러스에 손끝을 담갔다 빼야 될까 싶네요. 그럴 확률은 극히 적습니다. 그리고 만약 병리사 분 손에 그런 위험한 세균과 바이러스가 있었다면, 그날 그 분께 채혈받은 대부분의 환자가 감염됐을 것이고 역학 조사를 통해 알려져 이미 파직 당하셨을 확률이 높습니다. 아무튼 손끝에 있는 세균이나 바이러스로는 감염될 확률이 거의 불가능하다 라고 생각하셔도 됩니다. 간염이나 성병 바이러스는 생활 속에서 얻는 경우가 많습니다. 흔한 간염 바이러스 같은 경우는 술잔을 돌리다가 얻기도 하고, 오염된 물을 섭취했다가 걸리기도 하죠. 또 성병 바이러스는 감염자와의 성관계가 가장 '쉬운' 루트이지만, 운이 없게 치과, 네일샵이나 타투샵에서 걸릴 수도 있습니다. 제가 지금 제일 쉬운 루트라고 설명 드린 이유가 성관계처럼 서로 피부를 접촉하고 체액을 섞어서 대량의 바이러스에 노출되어야 걸리기 때문입니다. 가끔 성관계를 하고도 성병에 걸리지 않는 사람들이 있을 정도로 사람의 면역 체계가 강하기 때문에 그렇습니다. 이번 코로나가 비이상적으로 사람을 잘 감염시키는 것이 다들 놀랍다고 하는게 다 이런 이유 때문이에요. 간혹 저런 채혈 방식으로 인해 조금 걱정되실 수는 있으나, 현장에서 걱정된다라는 마음을 잘 표현해주시면 병리사 선생님들께서 분명 다시 소독하시고 잘 채혈해주실 겁니다. 채혈하는 순간만큼은 병리사 선생님들 머리속에는 온통 앞에 계신 환자분 생각 뿐인걸요 ☺️ 제 대댓글로 인해 댓글 작성자 분께서 조금이나마 안심이 되셨으면 합니다.

@ThisIsGraduateStudent 자세하고 친절한답변 매우 감사합니다:)

@@취우이야기 감사합니다. 많이 부족한 설명인데 도움이 되셨다니 너무 기쁘고 다행입니다. ☺️ 눈이 많이 내리는데 건강 조심하시고 안전운전하시기 바랍니다. 🥰

@@Spharkling 슾하클링님이 좋으셔서 저도 좋아요! 😆🥰 좋은 주말 되세요 🫶

@@남민우-t3r 도움이 되셨다니 다행입니다 🥹 감사합니다 ㅠㅠ 많이 부족합니다 좋게 봐주셔서 감사해요 🥰 좋은 밤 보내시고 내일도 좋은 하루 보내시기 바랍니다!

@@GaramChoi-h6j 저는 당연히 추천 드립니다! 제가 맨댈리라는 건 처음 들어봐서 아직 사용해보지 못 했으나, 저는 엔드노트 추천 드립니다. 엔드노트가 처음에 적응하기 조금 어렵고 가끔 리셋돼서 화가 날 때도 있지만, 적응하면 은근히 편합니다. 특히 장편 논문을 쓸때, google scholar에서 논문 import해오거나 reference article을 많이 넣어야 할때 상당히 편해요 🥰

@@이지연-b9m5y 안녕하세요 이지연 선생님 감사합니다 ㅎㅎ 🥰 보여지는 형광값이 약해서 게인값도 올려보시고, 디지털게인값도 올리셨는데, 그럼에도 불구하고 형광이 뜨지 않어 레이저 파워와 핀홀값을 조정하신 건가요? 보통 레이저 파워는 별짓을 해도 형광이 잡히지 않을때 건드리는 최후의 옵션 느낌이긴 합니다. 그런데 레이저 파워를 건드려야 간신히 볼 수 있을 정도라면, 그건 타겟단백질이 너무너무 적게 있다거나 선생님 말씀처럼 항체가 안붙은것일 수 있습니다. 항체 데이터시트에 ICC가 가능한 항체라고 적혀있는지 확인해보시고, 같이 적힌 reference 논문들에서 농도를 어느 정도로 사용했는지 참고해보세요. 가장 시도하기 좋은 건 항체 농도를 조금 높혀서 사용해보시는 겁니다. 샘플간의 gain값은 안바꾸시는게 좋습니다. 말씀하신것처럼 일정한 데이터가 되죠. 첫 샘플에서 모든걸(AU 포함) 세팅해주시고, 그 뒤에는 XY평면좌표와 초점만 조절해주셔도 충분합니다. 😉

@ 자세하고 친절한 답변 정말 감사합니다 박사님, 덕분에 문제 해결 하는데 힘이 되었습니다🥹 정말 한줄기 빛이세요🙊

@@이지연-b9m5y 아닙니다 ㅠㅠ 전 한게 없는걸요. 다 지연 선생님께서 손 기술이 좋으신 덕에 잘 된 걸요 😊 혹시 궁금한게 또 생기시면 언제든 찾아와주세요. 좋은 하루 보내시기 바랍니다. 🥰🙋‍♂️

@@Lab_Medical 안 됩니다. 특히 끈적한 용액일수록 더욱 안 됩니다. 플라스틱은 액체를 최대한 머금으려는 성질을 가지고 있기 때문에 2 step까지 누르지 않으면 팁 안에 용액이 남습니다. 한마디로 덜 나간거죠. 정확한 분주를 위해선 2 step까지 하셔야 합니다. 기포는 안나면서 정확한 용량을 분주하고 싶으시면 reverse pipetting을 해보세요. 1) 1 step을 누른 후 2 step을 살짝만 더 눌러서 용액을 빨아들여 보세요. 아마 세팅값보다 조금 더 들어온 상태일 거에요. 2) 여기서 분주하고 싶으신 곳에 대고 1 step까지 눌러 용액을 내보내세요. 팁 안에는 2 step 살짝 더 눌러준만큼 용액이 조금 남아있을 겁니다. 3) 이제 용액을 다시 빨아들여보세요. 다시 1 step까지 눌러서 용액을 분주하며 반복합니다. 팁에 살짝 남아있는 용액 때문에 거품이 나지도 않으면서, 1 step만 눌렀다 뗐다 반복하므로 세팅값만큼 정확한 분주가 가능해집니다. ☺️

@ 아 stepㅋㅋㅋㅋ 오타가 ㅋㅋㅋ 감사합니다!!

@Lab_Medical 엇 저도 stop인지 이제 봤어요 ㅋㅋㅋㅋㅋㅋ 넵넵!! 좋은 하루 되세요 🙇🥰

@@떡볶이먹고싶다-r9d 오...엄청 많죠. 혹시 이거 방송 주제로 한번 다뤄드릴까요?

​​@@ThisIsGraduateStudent 넵! 그래도 감사하고 실험전 간단하게 알고 가면 좋을 대표적인것들을 알려주셔도 감사하겠습니다!

@@떡볶이먹고싶다-r9d 넵넵 ㅎㅎ 자세한 건 방송때 말씀드리고 여기도 간단하게 남겨둘게요! 어떤 실험인가에 따라 다르겠지만, 생명쪽 실험이라 생각하고 말씀 드리겠습니다. 1. 실험대 위를 깔끔하게 정리하고, 손의 동선을 생각해서 팁, 시약, 웨이스트박스를 배치한다. = 생각보다 에어로졸에 의한 컨탐이나 교차오염이 빈번하게 이뤄집니다. 무균술에 대해서 공부하는 것이 가장 좋겠지만, 시간이 부족하거나 여건이 안 된다면 오염된 물체가 시약 위를 지나가게 손의 동선이 세팅되어있지는 않은지 유심히 살펴보세요. 은근 컨탐으로 인해 잃는 것이 많답니다. 2. 안전용품 착용! = 위험한 시약이나 세균들이 옷, 화장, 손목 등에 묻어 그대로 집까지 가는 경우가 많아요. 기본적인 안전용품(장갑, 가운, 보안경)을 착용해야 안전합니다. 괜히 다치거나 감염되면 몸도 상하고 아픈 동안 아무 것도 못하니 시간도 날리게 되죠. 3. 철저한 실험디자인 = 내가 어떤 시약이 필요한지, 어떤 컨트롤 그룹이 필요한지, 언제 실험을 시작할지 등등 자세히 계획을 짜고 실험에 들어가야 덜렁거리다가 실험을 망치는 경우가 줄어듭니다. 자세하게 계획 짜는 방법에 대해서도 알려 드리겠습니다! 이 외에도 많은 것들이 있으나 개인적으로 가장 중요하게 생각하는 3가지만 적어보았습니다. ㅎㅎ 좋은 밤 보내세요! 방송 날짜는 추후 다시 알려드리겠습니다!!

​​@@ThisIsGraduateStudent 감사합니다! 정리된 방송 기다려보겠습니다! 혹시 랫드혈청을 이용하여 실험을 진행할건데 보고서에 넣을만한 주의사항도 있을까요?😢 보고서를 제출한다면 어느정도의 수준까지로 적어야하는게 좋을지 잘 모르겠습니다...

@떡볶이먹고싶다-r9d 혹시 중, 고등학생이신가요? 미성년자는 생물유래샘플을 법적으로 이용할 수 없습니다. 어떤 보고서를 작성하시는 건지 알면 좀 더 상세히 도와드릴 수 있을 것 같아요.

@@김진영-w1e9j 아니요 ㅠㅠ 저는 cytokine은 즈로 ELISA로 보는 편입니다. PMA나 ionomycin은 연구실에 있긴 하지만 사용하고 있진 않구요 ☺️

@ThisIsGraduateStudent 네 답변 감사합니다!

@@emmakwak1107 감사합니다 ☺️ 좋은 주말 되세요 ㅎㅎ

@@곽명경 보통 버퍼 문제이거나 단선 문제일 가능성이 높습니다. E9은 bio-rad 사에서는 change in load resistance 문제라고 얘기하는데, 제대로 전기가 흘러가지 않아 voltage 드롭 현상을 보이는 거죠. 새로운 탱크와 뚜껑을 찾아서 결합해보시거나, 새로운 버퍼로 교체해보세요. 그럼에도 똑같은 에러가 뜬다면 파워팩(전압 설정하는 장비) 문제일 가능성이 높습니다.

@@ThisIsGraduateStudent 답변 감사합니다. 구글링해도 E9에 대한 정보를 저는 못찾았는데, 어디서 찾으셨나요?

@@곽명경 저는 'biorad powerpac basic'를 구글에 검색해서 data sheet를 찾은 후, 내용 중 ctrl+f로 E9에 대해 찾았습니다!

@@ThisIsGraduateStudent 감사합니다!

@@곽명경 감사합니다 ㅎㅎ 좋은 주말 되세요 🥰

그리고 쥐 혈청 샘플은 따로 구매하신건가요? 아니면 키트에 포함된건가요 그리고 영상에 나온 것들 중에 키트에 혹시 미포함된게 있다면 어떤것인지 궁금,ㅁ합니다!!!

@@규성-v3w 안녕하세요 :) 키트는 보통 대리점을 통해 구매합니다. 대부분 수입 제품들이라 대리점을 통해 구매하는 것이 편해요. 코람바이오텍, 바이오드림, 준바이오텍 등등 다양한 대리점들이 있습니다. 우선 구글에서 anti-ㅇㅇㅇ ELISA kit로 원하시는 키트를 검색하신 다음, 그 키트의 catalog number와 이름을 대리점에 알려주시면 됩니다. 보통 개당 50~100만원 정도 합니다! 쥐 혈청 샘플은 동물 실험 후 직접 채혈된 샘플입니다. 키트마다 안에 들어있는 시약의 종류는 다 달라요. 하지만 샘플은 당연히 실험자가 직접 구해야 합니다. 보통 키트 안에 포함된 것은 항체, 발색시약, stop solution 등입니다. 혹시 관찰을 원하시는 단백질이 있으신가요?

안녕하세요 저 제품은 resorvoir라고 합니다. 원래 의미는 저수지 라는 뜻이지만, 실험용품으로는 시약을 담아두는 용기의 의미입니다. 저희는 SPL 사의 제품을 쓰고 있습니다.

@@ThisIsGraduateStudent 이번에도 감사드립니다 좋은하루보내세요

@@h2yper 글꼴을 살려야할땐 저도 선생님께서 말씀해주신 방법을 간혹 쓰곤 합니다. 그런데 이상하게도 도형이나 그래프가 깨지는 경우는 못 막더라구요 ㅠㅠㅠ 아무래도 figure 등에 도형(diagram), 그래프(프리즘 제외) 등을 많이 쓰는 연구원들이다 보니, 글꼴 도형 모두 살리려면 PDF화가 더 좋겠다 싶어서 말씀 드려봤습니다. ☺️

@@한정수-g5k 안녕하세요 한정수님 ☺️ 1. 네 맞습니다! 평균값을 수식 X에 넣어 농도 Y를 구하시면 됩니다. :) 2. T-test는 "서로 다른 그룹의 어떤 값이 통계학적으로 유의미한 '차이'를 보이는지 보이지 않는지" 알아보기 위해 사용하는 통계법 중 하나입니다. 가장 보편적으로 많이 쓰이는 방식이며, Student's t-test가 full name입니다. 보통 직접 계산하기 보다는 통계프로그램(SPSS, Graphpad Prism)들을 이용해서 산출하며, 자세한 내용은 라이브 랩미팅 중 그래프패드 프리즘에 대해 다루는 영상에서 확인하시면 좋을듯 합니다. 3. p-value는 t-test 등 통계를 돌렸을 때 나온 결과를 나타내는 지표 중 하나입니다. 보통 논문에서 그래프에 표시하는 ns, *, **, ***의 모양이 p-value를 말하는 겁니다. 통계적 유의성이 0.05 미만일 때는 * 1개, 0.01 미만일 때는 * 2개, 0.001 미만일 때는 * 3개식으로 표시하죠. 별이 많을수록 유의미한 차이를 보인다 라고 생각하시면 됩니다. 예를 들어 항암제를 처리 전, 처리 후의 암세포수를 비교하는 그래프가 있다고 해봅시다. 처리 후에 암세포가 실질적으로 감소했는지 t-test를 통해 알아낼 수 있고, p-value를 통해 편하게 인지 및 표기가 가능합니다. 자세한 내용은 statistics p-value를 검색해보심이 좋을 듯 합니다.

@@ThisIsGraduateStudent 이번에도 번거로운질문 늦은시간에 답해주셔서 정말 감사드립니다.

@@한정수-g5k 감사합니다 ㅎㅎ 궁금한게 있으시면 언제든 오세요 좋은 밤 되세요 ☺️

@@신유환-l9m 안녕하세요 신유환 선생님! 공익근무 중이시군요 ☺️ 고생 많으십니다. 나라를 위해 힘써주시는 점 감사드립니다. 네, redberry1245@naver.com으로 연락 주세요. 필요하신 자료 보내드리고 성심껏 도와드리겠습니다. 요즘 날씨가 많이 추워졌습니다. 감기 조심하시고, 몸 조심히 소집해제하시기 바랍니다! 👍🙆

@@한정수-g5k 안녕하세요 한정수 선생님! 답변 드리도록 하겠습니다. 1. 하나의 샘플을 여러 well에 반복해서 넣는 행위를 replication이라고 합니다. 1개만 넣으면 singleton, 영상처럼 2개씩 넣으면 duplicate, 3개씩 넣으면 triplicate...라고 칭합니다. 이렇게 반복적으로 넣는 이유는 실험이 내외부 요인으로 인해 잘 안 되었을 경우 오류를 바로잡기 위함입니다. 가끔 지문, 이물질, 항체 문제 등으로 인해 샘플의 흡광도가 너무 높게 나오거나 낮게 나오면 여러 well의 평균값으로 보정이 가능하며, 심지어는 잘못 나온 well의 흡광도를 쓰지 않고 다른 well의 흡광도만 선택하는 방식으로 실험 오류를 바로잡을 수 있죠. Well을 많이 쓰면 쓸수록 보정이 잘 되어 정확한 평균값을 얻을 수 있지만, well의 가격이 비싸다보니 경제적인 이유로 duplicate를 많이 쓰는 편입니다. :) 2. 보통 ELISA의 calibration이 말하는 의미는 blank를 가지고 하는 보정을 말합니다. Blank는 아무것도 들어있지 않은 시약을 넣은 well을 의미합니다. 이론상 흡광도가 0이 나와야 하나, 시약의 굴절도 및 well 플라스틱 바닥의 굴절도 등으로 인해 흡광도는 0.001~0.04 정도 양수로 찍힙니다. 이 blank의 (평균) 흡광도를 모든 well에 빼주면, 이론상 blank가 0이 나왔을때 다른 well들의 흡광도를 구할 수 있기 때문에 calibration이라고 부릅니다. 하지만, 이걸 하든 안 하든 통계적 유의성이나 샘플의 경향도에는 큰 영향을 미치지 않기 때문에 저는 생략하는 편입니다. :) 혹시 또 궁금한게 있으실까요? ☺️

@@ThisIsGraduateStudent 설명서에 96개 플레이트의 웰에 스탠다드, 컨트롤, 샘플 을 각 웰에 넣는다는데 1. 스탠다드와 컨트롤의 차이점과 각각의 역할들이 어떤것인가요? 2. 키트 설명서를 보면 스탠다드 물질과 희석법 은 있는데 컨트롤에대한 말은 없어 컨트롤은 어떤것으로 하는지 궁급합니다

@@한정수-g5k Standard는 이미 농도가 알려진 물질입니다. 이미 농도가 알려진 물질의 흡광도를 같이 재서, 모르는 샘플의 흡광도를 가지고 농도를 추정할 수 있죠. 쉽게 예시를 들어드리겠습니다. 어떤 물건의 길이가 알고 싶다면, 우리는 자(ruler)를 사용합니다. 자는 이미 길이를 알고 있는 물체기 때문에, 자에 물체를 가져다 대면 물건의 길이를 잴 수 있죠. Standard가 자의 역할을 한다고 생각하시면 됩니다. 다만, 한번만 새겨두면 평생 쓸 수 있는 자와 달리, standard는 매번 ELISA마다 sample과 같이 측정해줘야 합니다. 같은 물질이어도 언제, 어디서, 어떻게 측정하는지에 따라 흡광도가 다르게 나오거든요. 심지어 같은 사람이 똑같은 방법으로 해도 오차가 발생하는 것이 생물학입니다. 그만큼 민감한 실험기법이라 그렇습니다. Standard가 샘플의 농도 계산을 하기 위해 well에 넣어주는 물질이라면, control은 positive control, negative control 두 종류로 역할이 조금 다릅니다. Positive control은 항상 나와야 하는 시약이고, negative conteol은 흡광도가 나오면 안되는 시약입니다. 보통 이런 control들은 실험이 제대로 안 되었을때 그 능력을 발휘합니다. 만약 샘플이나 스탠다드를 측정했는데 흡광도가 하나도 안나왔다면? 우리는 스탠다드가 잘못된건지, 샘플이 잘못된건지, 측정 장비가 잘못됐는지 판단할 수 없습니다. 그런데 만약 같이 넣은 positive control도 아무 흡광도가 찍히지 않았다면, 나와야 할 흡광도가 나오지 않은 것이니 substrate solution이나 측정 장비, 코팅 항체 등으로 예상가능한 오류의 범위가 훨씬 좁혀지겠죠. Negative control도 마찬가지입니다. 흡광도가 나오면 안되는 well의 흡광도가 측정된다면, 분명 아무 것도 없을 것이라고 예상되는 샘플의 흡광도가 측정되었을때 오류의 원인을 예상하기 쉬워지겠죠. 다만, standard가 농도대로 딱딱 나오는 것을 positive control, blank 흡광도가 0에 가깝게 찍히는 것을 negative control로 응용해서 사용할 수 있기 때문에, 최근에는 control을 동봉하지 않는 경우가 많습니다. Control이 있는 키트의 경우 보통 같이 동봉되어 있습니다. Control 시약이 동봉되어있지 않지만 꼭 쓰셔야 하는 경우라면, recombinant protein을 positive control, blank 시약(또는 PBS)을 negative control로 사용하시면 됩니다. :)

@@ThisIsGraduateStudent 어휴.. 너무 정성스런 답변 감사합니다 늦은시간 알려주셔서 감사드립니다 앞으로도 elisa에 궁금한게있다면 나중에 또 여쭈어봐도 될까요?

@@한정수-g5k 그럼요 언제든 물어보세요 친절이 답변 드리겠습니다. :) 좋은 밤 보내시기 바랍니다 ☺️

@@김소연-c7q 안녕하세요, 김소연 선생님 ☺️ 해석 상으로나 원리상으로나 standard와 sample을 모두 넣으신 후에 HRP를 넣으시는게 적절한 방법입니다. 🙆 만약 각 well마다 sample 넣고 HRP 넣고, sample 넣고 HRP 넣고 하는 방식이었다면, "Add standard or sample per well and thereafter HRP-conjugate immediately"라고 적혀있었을거에요 😊 잘 이해되셨을까요? 오늘도 좋은 하루 보내시고, ELISA 좋은 결과 있으시길 바랍니다 🥰

@@수수깡-c7s 안녕하세요 수수깡님! 잘 이해되셨다니 다행입니다. 제가 더 감사하네요 ☺️ Tip에 단백질이 든 상태에서 well이 아닌 빈 buffer 부분을 찍는 이유에 대해 물어보셨는데요. 단백질 샘플을 빨아들인 tip 바깥쪽에는 단백질이 버퍼와 함께 묻어있을 가능성이 높습니다. 이 상태로 well 위 버퍼 수면 쪽에 닿게 되면, 단백질이 퍼지면서 가라앉게 되고, 의도치 않게 양 옆 well에 일부 loading될 수 있습니다. 그 양은 물론 0.1-0.5 uL 정도로 미세해서 단백질 염색에는 안 보일 수 있으나, 항체를 사용해서 민감하게 관찰할 때는 밴드가 희미하게 관찰될 수 있습니다. 실수로 단백질이 흘러들어간 well이 negative control을 위한 well이라면 더욱 문제가 되겠죠. 그래서 well에 로딩하기 전, well 바깥쪽 buffer에 tip을 한번 찍어서 밖에 묻은 잉여 단백질을 없애고 깨끗한 상태에서 well에 넣어 분주하는 것이죠. 이렇게 empty space에 dipping 하여 단백질을 없애줄 수도 있고, 단백질을 빨아당긴 상태에서 마이크로파이펫 눈금을 올려 샘플을 팁 안쪽으로 끌어당긴 다음 2 step까지 분주하는 방법도 있습니다. 정답은 따로 없으니, 편한 방법을 선택해서 사용하시면 됩니다. 이해가 되셨을까요? 다른 궁금한 점은 없으신가요? 🥰

한방에 이해됐습니다!!! 친절하게 답변해주셔서 너무너무 감사합니다. 앞으로도 영상 잘 챙겨보겠습니다 감사합니다!!!🎉

@@수수깡-c7s 감사합니다 ㅎㅎ 좋은 하루 되세요 ☺️

@@이스-u7k 안녕하세요 이스님! ㅎㅎ 오랜만에 뵙습니다. 😆 과정들 전부 너무 잘 적으셨습니다! 공기 중에 떠다니는 에어로졸에도 RNase가 있을 수 있어요. 그래서 항상 조심 또 조심해야죠 ㅠㅠ ☺️

@@이림-n9u 앜ㅋㅋㅋ 시켜줘요 이림님 명예마약상 🙈

@@Bambiiiii585 직접적으로 말씀 드리긴 그렇지만... 어둠의 경로가 안 되는 프로그램은 없을거란게 제 생각입니다 ㅎㅎ 😉🤭

@@ThisIsGraduateStudent 넵 감사합니다!

@@MAY_bee0 도움이 되었다니 다행입니다 🙈 그럼요 PPT랑 프로토콜 자료도 함께 보내드리겠습니다! redberry1245@naver.com으로 메일 하나만 보내주실 수 있으신가요? 😊

@@ThisIsGraduateStudent 보냈습니당!

@@MAY_bee0 넵넵! 방금 회신 드렸습니다 😊 좋은 주말 되세요 🙇

@@나래뒷간 다음주 수요일 10/02 22시 방송에서 꼭 다뤄드리겠습니다! 혹시 급하신 거라면 redberry1245@naver.com으로 메일 주시면 함께 도와드리겠습니다.

@@AbdifetahIOmar-zd6gh Oh, thank you so much. If it's okay, how about that I send you my protocol? I sometimes send my protocol to my subscribers if they want. 😊 Here's my E-mail, redberry1245@naver.com I hope you have a good day. Thanks again.

우와... 저도 많이 배워갑니다! 👍👍 상세한 설명 감사드려요!

1:00:00 전체적으로 shift된 경우, positive/negative 구분은 되어 결과는 볼 수 있겠지만, 일자별로 harvest하였다고 언급하신 것으로 보아서는 앞선 실험과 실험조건 setting 자체가 달라졌다고 볼 수 있기에 재실험을 권장합니다. 재실험시에는 compensation은 새로 설정해야 하고요 경과를 볼 경우에는 같은 compensation setting으로 최대한 동일한 조건하에 분석하는 것이 좋습니다. 비교분석을 할 경우에 경과별로 파일들을 전부 모아서 histogram을 merge할텐데, negative peak가 일부는 10^2부분에 있고 일부는 10^3에 있다면 negative부분이 하나로 겹치지 않겠지요 **기기 정기점검, 수리 등의 경우에는 반드시 엔지니어/기기관리자 점검일 이전의 실험의 compensation은 다시 사용할 수 없음을 명심하셨으면 합니다. 관리자 맡을 당시에도 사용자분들에게 매번 공지했던 사항이긴 한데, 엔지니어나 관리자가 점검을 거칠 시에는 CST라는 과정을 거치게 되는데, 이 과정에서 레이저 설정이 전부 재설정되기에 '이전 레이저 상태'에서 잡혀있던 실험설정들은 이후에 찍을 시에 전과 다르게 나올 수 있습니다. 레이저는 수차례 사용하면서 사용하면서도 자연적으로 조금씩 흔들릴 수 있기 때문에 기기작동에 문제가 없더라도 관리자가 정기적으로 CST점검으로 재설정해주게 됩니다. (점검 여부가 알고 싶을 경우 상단 메뉴CST-> report 클릭시 날짜별 내역 열람 가능합니다) 원칙은 매 실험마다 새로 compensation을 설정해주어야 하나, 여태 실험할 때엔 동일샘플/동일실험의 경우 점검이 없는 한 3개월 정도 까지는 같은 compensation setting에 찍어도 무방했습니다.

@@뇨로로롱 정말 많이 배워갑니다. 너무 멋지세요 👍👍

@@현창환보건과학대학의 안녕하세요 :) XY 그래프나 Grouped 그래프를 선택하시고, 가장 왼쪽 세로열에 시간을 적으시면 그래프에 표시됩니다! 간혹 세로열이 안뜨는 경우가 있는데, A1 cell 왼쪽 위 접힌 부분을 클릭하시면 표시됩니다. :) 만약 도움이 필요하시면 redberry1245@naver.com으로 메일 주세요. 😊

@@7w7-j4m 아닙니다 인큐베이터에는 넣으셔야 온도를 37도로 유지하실 수 있어요! 그리고 양초로 하는 방법은 anaerobic chamber와 gas pack을 사용하는 방법 보다는 O2 제거효율이 떨어집니다! 중요한 실험은 꼭 올바른 장치를 사용하세요 ☺️

@@ThisIsGraduateStudent 감사합니다🙇🏻‍♀️

@@삼오-h8y 감사합니다! ㅎㅎ 좋은 하루 보내세요 🥰