I’m from the US and I’m a beginner in Korean. I do SDS PAGE at my chemistry lab so this helped me with my research and language learning! So cool☺️ 감사합니다!
I’ve never imagined the effect when making a video. It's amazing and I'm so proud of myself🤨. Thank you very much. You gave me the power to create another contents.✨
한국바이오마이스터고등학교 학생입니다 Stracking Gel이 존재하는 이유는 다들 아시겠지만 영상에 나오지 않아 덧붙여봅니다. 저희 학교의 경우 Dye에 Cl-와 pI가 6.2인 Glycine이 존재한다고 합니다. Stracking Gel은 조제 시 pH가 6.8을 띄게 되는데 이 Gel에 Cl-, Glycine, Protein(이하 Sample)이 전기영동될 시 각 물질의 속도 차이가 발생합니다. 음이온인 Cl-, Sample, Glycine(Gel의 pH가 Glycine의 pI와 근접한 pH라 느림)순의 속도로 전기영동이 진행되며 이 사이에서 High voltage gradient가 발생한다고 합니다. 이 High voltage gradient로 Separating gel까지 가는 과정에서 Cl-와 Glycine 사이에 Sample 이 끼여 Separating gel에 도착하기까지 모두 같은 선상에 놓인 채로 전기영동되어 단백질의 크기가 분리되지 않으며 Separating gel에 동시에 돌입하게 됩니다.
이렇게 Separating gel에 돌입한 Cl-, sample, glycine은 pH 변화에 따라 속도 차이가 뒤바뀌게 되는데 Separating gel에서 속도는 Cl-, glycine, sample 순으로 빠릅니다. glycine이 빨라진 이유는 눈치채졌겠지만 Separating gel의 pH가 8.8이기 때문에 glycine의 pI와 멀어졌기 때문입니다. 이렇게 속도가 변하면 자연스럽게 sample의 속도가 가장 느려지게 되며 느려진 sample은 자신의 크기에 따라 달리는 속도가 달라지게 되고 결국 자신의 크기에 따라 분리가 되는 것입니다. p.s) 모르셨던 분이 있으시면 조금이나마 도움드리고 싶어 적은 내용이고 저 역시 이 영상에서 배워가는 것이 많습니다! >TMI니까 여유 없으신 분은 넘어가주세요ㅎㅎ 조금 TMI를 적자면 저희는 IgG1을 SDS-PAGE로 분리하였으며 분석물은 세포상등액을 FPLC(Protein G column, Q HP column을 이용, Affinity, Anion Exchange Chromatography법)로 분석한 결과물이었습니다. 본 실험은 17살, 19살에 경험하였으며 위의 내용을 학습하게 된 것은 2021년, 19살때 입니다.(17살에는 간단히 훑고 맛보기 식으로 실험을 진행)
@바나나 ㅎㅎ 오 저랑 똑같네요 ! 저도 신생랩 와서 다 셋팅하고 사수 없이 혼자 배운 케이스 ㅜ 대신에 제대로 공부할 수 있고, 사수한테 관리당할 일이 없다는 장점이 있으니까 자부심 가지시고 화이팅 ! ㅎㅎ 제가 웨스턴 블랏 영상을 찍어는 놨는데ㅜ 바빠서 편집 못하고 있네요 ㅠ 혹시 또 원하시는 실험영상이 있나요 !
효린세스님~~ 매번 영상 잘 보고있습니다. 현직 고등학교 생물교사입니다. 동아리 아이들이 웨스턴블롯을 해보고싶어하는데 제가 대학원을 나온것도 아니고, 대학교 다닐때 준비해준 시료로 딱한번 하라는대로 따라서 실험 해본 경험밖에 없어서 기억도 거의 안나고(그것도 sds page까지만 해보고 트랜스퍼과정은 못해봤어요ㅠㅠ) 막상 실험을 하려니 재료준비부터 막막하긴한데요.. 혹시 1. 단백질샘플은 어디서 구하는지(애들 데리고 실험할때 보통 액틴으로 많이 한다던데 그조차 어디서 구하는지 모르겠어요.) . 그리고 2. SDS PAGE와 웨스턴블롯에 대한 레시피나 매뉴얼이 있다면 혹시 공유가 가능할까요? 여러유튜브 찾아봐서 스태킹겔이랑 러닝겔 레시피는 어찌어찌 구했는데 SDS를 겔에 넣는다는건지 단백질샘플에만 넣는건지 아님 둘다 넣는건지, 그리고 샘플링할때 머캅토에탄올이나 APS, 티미드 같은 애들은 어느정도로 넣어야하는지, 그리고 CHEMI DOC이 학교에 없는데 트랜스퍼 결과 확인을 그러면 못하는건지...쉽지가 않네요ㅠㅠ
안녕하세요 영상 너무 도움됐습니다😍 궁금한 것이 있어서 질문드립니다! Western blot에서 blocking시에 4% skim mlik를 사용하고 있는데요 phospho form protein부분만 3%BSA-TBST를 사용해서 blocking을 하고 있습니다! 근데 phospho form도 skim milk로 blocking하고 항체만 BSA로 붙여도 괜찮을까요??
@권슬기 영상 봐주셔서 감사합니다 ! 영어논문은 ㅜㅜ 자주 읽는 수밖에 없는 것 같아요. 처음엔 그 분야에 모르는 단어도 실험도 너무 많고 하잖아요. 논문의 모든 문장을 이해하려고 하면 너무 힘드니까 일단 전체 흐름을 이해하고 figure해석을 우선으로 해보세요! 그렇게 알고나서 세부적으로 보면 읽힐 때도 있거든요 ! 인트로 이해하고 이 논문이 새롭게 발견한 점만 알고 가도 엄청난 거예요. 그리고 내용을 막 달달 외울 필요는 없으니까 너무 부담갖지 마세요. 내 분야다보면 반복해서 읽게 되고 그러다 보면 나중엔 막 스킵해도 되고 그래요 ㅎㅎ 화이팅 🌟
@@누구세용-b2m 이 영상은 웨스턴을 한 건 아니고 PAGE가 목표였구요, 아마 GFP일 거예요. 이 영상에서는 아니지만 보고 싶은 단백질을 검출할 수 있는 1차 antibody를 써야겠죠? 그리고 보통 2차 안티바디에 HRP가 있고 H2O2랑 형광발색기질을 쓰는데 이건 회사 제품마다 달라서 제가 어떤 걸 썼는진 너무 옛날이라 기억이 잘 안 나네요..
밴드가 잘 보이는 정도는 단백질 크기와 농도에 따라 달라지고, 각 칸에 넣을 수 있는 최대 양도 젤 회사에 따라 다 달라져서 확언을 드릴 순 없습니다. 로딩버퍼를 섞어 샘플을 만들 땐 로딩버퍼가 6X면 버퍼 1 : 단백질샘플 5 로 진행하면 되구요. 보통 래더는 5uL이면 충분하고 샘플은 10-20uL 정도 내리는 경우가 많아요. 정제된 샘플이라면 50ug 정도는 내려야 잘 보일 것 같습니다.
혹시 영상에서 사용하고 계신 전기영동 장치의 모델명을 알 수 있을까요? 제가 실험실에서 같은 모델로 sds page를 하고 있는데 전압 공급장치가 원래 없는건지 잃어버려서 없는건지 없어서 난감하네요ㅠ 장치에 따로 모델명이 나와있지도 않고... 모델명이나 영어로 카탈로그가 있는 웹사이트 주소를 아시면 알려주실 수 있을까요?
실험기기의 경우 기기마다 판매 혹은 대리점이 있으니 기기를 검색해보시면 찾을 수 있을 것이고 실험도구나 소모품은 파는 곳이 다양합니다. 바이오쪽 소모품의 경우 spl, 현대마이크로 같은 한국 제품도 있고, falcon, axygen, eppendorf 같은 외국 것도 있는데 대한과학 고려에에스과학 태신바이오사이언스 올포랩 YMS코리아 같은 곳에서 중개해주셨습니다.
![[효린세스X생화실조교] How to Protein Expression/Purification (Affinity chromatography/His-tag/EGFP)](http://i.ytimg.com/vi/PJ2oPzbS4Jk/mqdefault.jpg)
![[효린세스X생화실조교] How to Protein Expression/Purification (Affinity chromatography/His-tag/EGFP)](/img/tr.png)
![[New Western blot 2/6] 단백질용 젤 만들기(Polyacrylamide gel)](http://i.ytimg.com/vi/hpqeaESty5s/mqdefault.jpg)
증말 이집은 설명 맛집이라고 할 수 있겠습니다
본격 기초생명과학 과제 치기 전 보는 방송
I’m from the US and I’m a beginner in Korean. I do SDS PAGE at my chemistry lab so this helped me with my research and language learning! So cool☺️ 감사합니다!
I’ve never imagined the effect when making a video. It's amazing and I'm so proud of myself🤨. Thank you very much. You gave me the power to create another contents.✨
진짜 홀리씻~~~~ 이런 좋은 영상은 바로 구독 좋아요
이해가 너무 잘돼요!! 실험 공부 하면서 텍스트로만 볼 때는 감이 잘 안왔는데 비유해서 설명해주시니까 이해가 쉽네요
감사합니다♥️
정말 감사합니다...당장 해야하는 실험이라 유튜브로 보면서 공부하려고 타고타고 오다가 정말 잘 설명해주셔서 이것만봐도 다 이해될 것 같아요.
앞으로도 실험관련 영상 기대하겠습니다💕
@이화림 우아ㅎㅎㅎ 쀼듯✨ 고맙습니다 ㅎ
전필 시험범위인데 정확히 설명해주셔서 많은 도움이 되었습니다. 감사합니다.
이것저것 타고 오다가 보게 되었는데 설명 너무 잘해주셔서 전 몽툥이지만 이해가 잘돼요ㅠㅠ 감사합니다💕💕 진짜 그림 적절한거 일일히 찾기도 어려우셨을텐데 증말 최고에여ㅕㅕㅕ🤣🥰
@HB S 감사합니다 :)
효린세스님 덕분에 제 생실학점이 살아났습니다! 항상 좋은 영상 감사하고 꾸준히 보겠습니다~
@이상혁 헐.. 정말로 도움이 됐다니 완전 갬덩..🌸 진짜 완전 힘이 되네요 ㅋㅋ 도움되는 영상 계속 만들게요 ㅎㅎ
영상 너무 잘봤습니다.
추후에 웨스턴 블랏 영상도 기대하겠습니다 !
정말 감사합니다 ㅠㅠ 덕분에 바로바로 이해가 됩니다! 수업을 이해하는데도 정말 많은 도움 받고있어요. 질 높은 영상 감사합니다!!
ㅎㅎ 뿌듯하네요 :)
생물쪽 전혀모르지만 친절하게 설명해주시는게 좋네요 ㅎ 이런영상 보기만해도 기분좋아짐
@김준 자주 와주셔서 감사해요 ^^ 저도 기분이 좋아지네요 :)
감사합니다. 도움 많이 되었어요.. ㅎㅎㅎ
근데 여담으로 동영상이 굉장히 빨리빨리 지나가는데 서울대학교 학생이라 속독이 가능해서 그런건가요..?? 저는 한 10번정도 일시정지 버튼 누르고 정독했네요😂😂😂
제가 영상 만드는 능력이 부족했나봐요 ㅜ ㅎㅎ
꼼꼼히 봐주셔서 감사합니다~~
한국바이오마이스터고등학교 학생입니다
Stracking Gel이 존재하는 이유는 다들 아시겠지만 영상에 나오지 않아 덧붙여봅니다.
저희 학교의 경우 Dye에 Cl-와 pI가 6.2인 Glycine이 존재한다고 합니다.
Stracking Gel은 조제 시 pH가 6.8을 띄게 되는데 이 Gel에 Cl-, Glycine, Protein(이하 Sample)이 전기영동될 시 각 물질의 속도 차이가 발생합니다.
음이온인 Cl-, Sample, Glycine(Gel의 pH가 Glycine의 pI와 근접한 pH라 느림)순의 속도로 전기영동이 진행되며 이 사이에서 High voltage gradient가 발생한다고 합니다.
이 High voltage gradient로 Separating gel까지 가는 과정에서 Cl-와 Glycine 사이에 Sample 이 끼여 Separating gel에 도착하기까지 모두 같은 선상에 놓인 채로 전기영동되어 단백질의 크기가 분리되지 않으며 Separating gel에 동시에 돌입하게 됩니다.
이렇게 Separating gel에 돌입한 Cl-, sample, glycine은 pH 변화에 따라 속도 차이가 뒤바뀌게 되는데 Separating gel에서 속도는 Cl-, glycine, sample 순으로 빠릅니다.
glycine이 빨라진 이유는 눈치채졌겠지만 Separating gel의 pH가 8.8이기 때문에 glycine의 pI와 멀어졌기 때문입니다.
이렇게 속도가 변하면 자연스럽게 sample의 속도가 가장 느려지게 되며 느려진 sample은 자신의 크기에 따라 달리는 속도가 달라지게 되고 결국 자신의 크기에 따라 분리가 되는 것입니다.
p.s) 모르셨던 분이 있으시면 조금이나마 도움드리고 싶어 적은 내용이고 저 역시 이 영상에서 배워가는 것이 많습니다!
>TMI니까 여유 없으신 분은 넘어가주세요ㅎㅎ
조금 TMI를 적자면 저희는 IgG1을 SDS-PAGE로 분리하였으며 분석물은 세포상등액을 FPLC(Protein G column, Q HP column을 이용, Affinity, Anion Exchange Chromatography법)로 분석한 결과물이었습니다.
본 실험은 17살, 19살에 경험하였으며 위의 내용을 학습하게 된 것은 2021년, 19살때 입니다.(17살에는 간단히 훑고 맛보기 식으로 실험을 진행)
그리고 Separating gel 채울 때 겔 다 채운 뒤에 Isopropenol이 아닌 dw로 채워져도 매끈해져요!!
정말 자세히 잘 설명해주셔서 너무 감사해요 ㅠㅜㅠㅜ 해시태그에 사수가 무서울땐 효린세스라고 되어있는데 저는 신생랩실에서 사수 없이 혼자 연구하고 있어서 항상 막막하거든요 ㅜㅠㅜ 다음 실험 영상도 기대하고 있겠습니다!! ㅎㅎㅎ
@바나나 ㅎㅎ 오 저랑 똑같네요 ! 저도 신생랩 와서 다 셋팅하고 사수 없이 혼자 배운 케이스 ㅜ
대신에 제대로 공부할 수 있고, 사수한테 관리당할 일이 없다는 장점이 있으니까 자부심 가지시고 화이팅 !
ㅎㅎ 제가 웨스턴 블랏 영상을 찍어는 놨는데ㅜ 바빠서 편집 못하고 있네요 ㅠ 혹시 또 원하시는 실험영상이 있나요 !
@@hyorincess 단백질 발현 vector 디자인 하는 방법이나 primer 디자인 방법을 다루어 주는 영상이 있으면 좋을거 같아요!!! 제가 처음에 혼자할때 가장 힘들어했던 부분이였어요 ㅜㅠㅜ
😊
진짜 감사합니다 사랑합니다 진짜
50넘어 옛날 실험 이해하려니 힘들었는데
너무 좋네요! 사우전땡스^*
진짜 미친 가르침이다
감사의 의미로 구독과 좋아요를 드립니다.
영상 잘보았습니다!! 이 영상을 보고 실험진행할 예정인데 2-Mercaptoethanol은 어디에 사용하는 걸까요 ㅠㅠ?
Mercaptoethanol이나 DTT는 단백질의 disulfide bond를 끊어주는 역할을 합니다.
Sampling하는 파란색 로딩버퍼에 이미 들어가있는 경우가 많아요 :)
@@hyorincess 답변 감사합니다 한가지 더 여쭤봐도 될까요 ㅠ??쿠마시 브라이언트 블루에 에탄올 40% 아세트산 10%를 섞어서 염색하고 탈색하는 과정에서도 쿠마시 브라이언트 블루 40%와 아세트산 10%용액을 첨가하는것인가요 ~??
@@양멍멍이-u3u 탈색에선 쿠마시 없이요 !!!!!
요즘 WB을 주로하는데 잘배우고 갑니당!! 연구실 들어온지 얼마안돼서 농도가 절 괴롭히는데 혹시 농도 관련 지식이나 팁도 공유해주실수있을까요??
와 감사해요 대박
효린세스님~~ 매번 영상 잘 보고있습니다. 현직 고등학교 생물교사입니다. 동아리 아이들이 웨스턴블롯을 해보고싶어하는데 제가 대학원을 나온것도 아니고, 대학교 다닐때 준비해준 시료로 딱한번 하라는대로 따라서 실험 해본 경험밖에 없어서 기억도 거의 안나고(그것도 sds page까지만 해보고 트랜스퍼과정은 못해봤어요ㅠㅠ) 막상 실험을 하려니 재료준비부터 막막하긴한데요.. 혹시 1. 단백질샘플은 어디서 구하는지(애들 데리고 실험할때 보통 액틴으로 많이 한다던데 그조차 어디서 구하는지 모르겠어요.) . 그리고 2. SDS PAGE와 웨스턴블롯에 대한 레시피나 매뉴얼이 있다면 혹시 공유가 가능할까요? 여러유튜브 찾아봐서 스태킹겔이랑 러닝겔 레시피는 어찌어찌 구했는데 SDS를 겔에 넣는다는건지 단백질샘플에만 넣는건지 아님 둘다 넣는건지, 그리고 샘플링할때 머캅토에탄올이나 APS, 티미드 같은 애들은 어느정도로 넣어야하는지, 그리고 CHEMI DOC이 학교에 없는데 트랜스퍼 결과 확인을 그러면 못하는건지...쉽지가 않네요ㅠㅠ
안녕하세요 영상 너무 도움됐습니다😍 궁금한 것이 있어서 질문드립니다! Western blot에서 blocking시에 4% skim mlik를 사용하고 있는데요 phospho form protein부분만 3%BSA-TBST를 사용해서 blocking을 하고 있습니다! 근데 phospho form도 skim milk로 blocking하고 항체만 BSA로 붙여도 괜찮을까요??
안녕하세요 9:53 실험 과정에서 쉐이킹 해주는 이유가 뭔가요?
효린세스님 영상 정주행하구있습니당 ㅠㅠ
영어논문 잘 해석하려면 어떡해야하죠...
너무막막해요...ㅠㅠㅠㅠ
@권슬기 영상 봐주셔서 감사합니다 !
영어논문은 ㅜㅜ 자주 읽는 수밖에 없는 것 같아요.
처음엔 그 분야에 모르는 단어도 실험도 너무 많고 하잖아요. 논문의 모든 문장을 이해하려고 하면 너무 힘드니까 일단 전체 흐름을 이해하고 figure해석을 우선으로 해보세요! 그렇게 알고나서 세부적으로 보면 읽힐 때도 있거든요 ! 인트로 이해하고 이 논문이 새롭게 발견한 점만 알고 가도 엄청난 거예요. 그리고 내용을 막 달달 외울 필요는 없으니까 너무 부담갖지 마세요. 내 분야다보면 반복해서 읽게 되고 그러다 보면 나중엔 막 스킵해도 되고 그래요 ㅎㅎ 화이팅 🌟
@@hyorincess 우와 정말정말 감사합니다😍😍😍
Isopropanol대신 methanol사용해도 됩니다.
0:16 SDS-PAGE 설명 시작 1:40 SDS 사용 이유 3:00 DTT/b-mercaptoethanol 4:06 polyacrylamide gel이 만들어지는 원리 4:42 stacking/resolving gel 5:05 실험시작 젤만들기 8:14 sample preparation 9:00 electrophoresis 준비-시작 8:36 staining-destaining
본격 기초생명과학 과제 치기 전 보는 방송
혹시 타겟 protein은 뭐였고, 디스테이닝 하고나서 membrane에 transfer도 하셨나요?
하셨으면 항체와 발광체는뭐 쓰셨나요!
@@누구세용-b2m 이 영상은 웨스턴을 한 건 아니고 PAGE가 목표였구요, 아마 GFP일 거예요.
이 영상에서는 아니지만 보고 싶은 단백질을 검출할 수 있는 1차 antibody를 써야겠죠? 그리고 보통 2차 안티바디에 HRP가 있고 H2O2랑 형광발색기질을 쓰는데 이건 회사 제품마다 달라서 제가 어떤 걸 썼는진 너무 옛날이라 기억이 잘 안 나네요..
혹시 위 영상에서 단백질 샘플 만드실때 비율은 어떻게 하셨나요? 몇ul씩 넣어야 되는지 잘 모르겠네요;;
밴드가 잘 보이는 정도는 단백질 크기와 농도에 따라 달라지고, 각 칸에 넣을 수 있는 최대 양도 젤 회사에 따라 다 달라져서 확언을 드릴 순 없습니다.
로딩버퍼를 섞어 샘플을 만들 땐 로딩버퍼가 6X면 버퍼 1 : 단백질샘플 5 로 진행하면 되구요.
보통 래더는 5uL이면 충분하고 샘플은 10-20uL 정도 내리는 경우가 많아요. 정제된 샘플이라면 50ug 정도는 내려야 잘 보일 것 같습니다.
감사합니다^^
콤에 남은 아지랑이? 같은거 다 치우고 하시는지 궁금해요ㅜ 샘플 넣을때 너무 방해되던데요ㅜㅜ
방해가 되신다면 치우셔야죠 ㅎㅎㅎ
무거워서 깔려있는 거일 수 있는데 물이나 버퍼로 푸슝프슝 하면 없어질 거예요 ㅎㅎ
혹시 gel은 어디서 사는 게 제일 저렴할까요??
혹시 staining solution 만들때 ethanol과 acetic acid가 몇대몇 비율로 들어갔는지 알 수 있을까요?
기억이 안 나요. 랩마다 조금씩 다를 거예요. 저희도 그냥 검색해서 나오는 거 참고해서 썼을 거예요.
Thermofisher제품의 경우, 0.1% Coomassie® R-250 in 40% ethanol and 10% acetic acid라고 되어있네요.
혹시 영상에서 사용하고 계신 전기영동 장치의 모델명을 알 수 있을까요? 제가 실험실에서 같은 모델로 sds page를 하고 있는데 전압 공급장치가 원래 없는건지 잃어버려서 없는건지 없어서 난감하네요ㅠ
장치에 따로 모델명이 나와있지도 않고... 모델명이나 영어로 카탈로그가 있는 웹사이트 주소를 아시면 알려주실 수 있을까요?
@문승규 일단 영상 앞쪽에 있는 젤 만들 때 나오는 건 학부 자산이라 지금 잘 모르고요 ㅠ 뒤에 젤 내릴 때 나오는 제품은 BIORAD제품입니다.
모델명 : PowerPac(위첨자로 TM) Basic
시리얼넘버 : 041BR120469
입니다.
안녕하세요! 혹시 대학발표 ppt에 사진이 필요한데 캡처한 뒤 사용해도 괜찮을까요? 출처는 꼭 남기겠습니다!
알겠습니다~
감사합니다!!
안녕하세요? 실험도구 혹시 어디에서 구매하는지 알수 있을까요???
실험기기의 경우 기기마다 판매 혹은 대리점이 있으니 기기를 검색해보시면 찾을 수 있을 것이고
실험도구나 소모품은 파는 곳이 다양합니다.
바이오쪽 소모품의 경우 spl, 현대마이크로 같은 한국 제품도 있고, falcon, axygen, eppendorf 같은 외국 것도 있는데
대한과학 고려에에스과학 태신바이오사이언스 올포랩 YMS코리아 같은 곳에서 중개해주셨습니다.
@@hyorincess 헉 정말 감사합니다!
이거야이거! 다시보러왔어요!
난 바보야 봐도 모르겠어
죄송해여 ㅜ 제가 더 노력해볼게요