Protocolo técnica PCR - OPERON
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- Опубликовано: 10 дек 2017
- La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, según sus siglas en inglés) es una técnica usada en biología molecular para amplificar varias copias de una secuencia de ADN particular hasta cientos o miles de copias de esa misma secuencia.
Se trata de una técnica sencilla, económica y fiable que se puede aplicar a diferentes campos en la biología moderna y las ciencias relacionadas. Típicamente, el objetivo de la PCR es obtener suficientes copias de la región diana de ADN para poder ser analizada o usada posteriormente. Por ejemplo, el ADN amplificado por PCR (amplicones) puede ser enviado para secuenciar, visualizado por geles de electroforesis o por técnicas de hibridación, o ser clonado en un plásmido para realizar otros experimentos.
La técnica de PCR puede llevarse a cabo utilizando ADN de diferentes fuentes como tejidos y microorganismos, incluyendo sangre periférica, piel, pelo, saliva y bacterias. Solamente se necesitan trazas de ADN para generar copias suficientes para ser analizadas usando los métodos de laboratorio convencionales. Por esta razón, la técnica de PCR es muy sensible, así que es extremadamente importante mantener buenas prácticas de laboratorio, especialmente en lo refrente a higiene, orden y seguridad en cualquiera de las fases de la técnica (extracción de ácidos nucleicos, preparación de las reacciones y detección del material amplificado), con el fin de evitar posibles contaminaciones que pueden afectar al resultado del test.
Para minimizar este problema existen ciertas condiciones que deben ser controladas, como:
· Zonas de trabajo diferentes para separar las zonas con amplicones de las zonas libres de ellas.
· Set de equipamiento independientes que no deben compartirse entre áreas (micropipetas, gradillas, batas, guantes, rotuladores, microtubos, centrífugas, neveras, etc.).
· Mantenimiento de un flujo unidireccional de trabajo desde las zonas más limpias hasta las más sucias.
· Flujos de aire con presiones positiva y negativa según el área.
· Materiales (puntas de micropipeta, microtubos, etc) de calidad PCR, libres de ADN exógeno, DNAsas y RNAasas.
· Puntas de micropipeta con filtro para reducir el riesgo de contaminación por formación de aerosoles.
· Limpieza de la superficie utilizada para preparar las reacciones de PCR con etanol (70 %) y, si es posible, descontaminarse con radiación ultravioleta antes y después de cada preparación (15 a 30 min).
El video muestra un ejemplo de cómo se debería preparar una PCR correctamente, mostrando las diferentes zonas por las diferentes actividades. 
Наука
Los felicito excelente trabajo!
¡Muchas gracias, Lizeth! Nos alegra que te haya servido.
Gracias por el video, espero suban mas videos asi 😁
¡Gracias a ti por tu comentario, Ángela! ¡Nos alegra que te haya sido de utilidad!
Muy bueno, me gustó el vídeo.
¡Muchas gracias, Mauricio! Esperamos que te haya sido útil.
Excelente!
¡Nos alegra que te haya sido de ayuda, Katheryn!
Ensina direitinho!! Obrigada pelo vídeo
Thank you for your comment, Sara! We are glad it helped you!
¡Donde puedo visualizar el manual del protocolo?
Hola, Aldo. Muchas gracias por tu comentario.
Cada producto lleva su propio protocolo. Puedes encontrarlos en nuestra web, en el apartado de instrucciones de cada uno de ellos . Puedes acceder a todo el listado de productos disponibles a través del siguiente enlace: operon.es/es/molecular-diagnostics/
Esperamos haberte ayudado.
¡Saludos!
Quien es el profesional que lleva a cabo estre procedimiento? Un bioquimico, biotecnologo o medico..?
Se puede decir que si, qué los bioquímicos.
Muchas gracias por tu comentario.
La PCR debe de ser llevada a cabo siempre por profesional cualificado y en un laboratorio que disponga del equipamiento adecuado. El médico no podría hacerla en una consulta, debería llevar la muestra a un laboratorio.
Esperamos haber sido de ayuda.
¡Saludos!
@@operones Hola . Si en una ciudad con 400 contagios al dia ,como hace frente un experto a tantos contagios y claro el resultado lo tiene que dar en el dia siguente porque la análisis va muy lenta y mas rapido es imposible. Se lo agradecería si me contestas porque para mi es una duda muy grande. Gracias
Los felicito
Adelante
¡Muchas gracias por tu comentario, AgustÍn!
Soy un total ignorante del tema pero, cuando introduces la misma pipeta en diferentes tubos no favoreces la contaminación entre éstos últimos???
¡Hola, Albert!
Efectivamente, se debe cambiar la punta de la pipeta al cambiar de reactivo para evitar la aparición de contaminaciones al realizar una prueba de PCR.
Si se va a dispensar el mismo reactivo a varios tubos que están vacíos y limpios, sí se podría usar la misma punta. No obstante, para la adición de los siguientes reactivos será necesario cambiar la punta para cada tubo.
¡Saludos!
tienen un video de qPCR
¡Hola, Heriberto!
Muchas gracias por su mensaje. Efectivamente, disponemos de dos versiones, una real y una animada. Estamos acabándolos y en breves los tendréis también disponibles en el canal.
¡Saludos!
De qué país son?
¡España! :)
Al quitar la punta de la micropipeta con la mano en vez con el botón esta contaminando el tubo eppendorf al abrirle. Por lo cual el resultado nunca será 100% real.
Por el resto buen video.
¡Hola, Amelia!
Idealmente, como comentas, la punta debe quitarse apretando el botón de la pipeta, de manera que esta se deposite en el cubo de residuos sin tocarla, y sin que esta salte fuera del contenedor.
En algunos casos, al caer la punta al contenedor, esta puede rebotar o salpicar, lo que sí puede provocar contaminaciones. En esos casos, se puede ayudar a quitar la punta con los dedos para depositarla de forma suave en el contenedor, siempre que se toque solamente la parte superior de la punta, que es la que no entra en contacto con los tubos.
De todos modos, vamos a tener en cuenta tu comentario en futuros vídeos para aclarar estos puntos.
¡Muchas gracias por tu aporte y un saludo!
Buen video pero no dice si finalmente sale positivo o no o como se lee la máquina. Y otra cosa esque el profesional no lleva mascarilla mientras lo hace espero q si la lleve si trabaja con algún virus infectivo
¡Hola!
Muchas gracias por tu comentario.
Efectivamente, el vídeo representa únicamente el proceso de ejecución de la PCR, pero éste iría seguido después de una hibridación que puedes ver en otros vídeos de nuestro canal y tras la cual se obtendrían los resultados. De la misma forma, la extracción del ADN/ARN se ha realizado con todas las medidas sanitarias necesarias en un paso anterior que tampoco aparece reflejado, puesto que en este punto de la PCR éste ya se encuentra purificado y no hay riesgo de infección por microorganismos. No obstante, el vídeo fue realizado antes de comenzar la pandemia, por lo que hoy en día para evitar posible contagio por SARS-CoV-2 entre los propios operarios del laboratorio, sí sería necesario utilizar mascarilla en todo momento.
Esperamos haber resuelto tus dudas.
¡Saludos!