PCR: reazione a catena della polimerasi • Spiegazione semplice
HTML-код
- Опубликовано: 12 сен 2024
- Esplora l'hashtag #ZeroKelvinPills per altri video di spiegazioni semplici su concetti e processi della biologia.
Lungi da me la pretesa di spiegare tutto sulla PCR, spero che questo video possa servire come base per capire il meccanismo di funzionamento della PCR.
Okay, non sono bravo con la plastilina.
Seguimi su:
Instagram: smarturl.it/Vit...
Facebook: smarturl.it/Vit...
Come giro i video?
Camera: amzn.to/2XNStXL
Microfono: amzn.to/2ILH4Bt
Treppiede: amzn.to/2XPnxGu
![[DOKKAN BATTLE] Worldwide Campaign Announcement Video Part 2!](http://i.ytimg.com/vi/JpT5Voak6WA/mqdefault.jpg)
ti prego fanne altri riguardanti le analisi di laboratorio, Real time pcr, elettroforesi, RFLP sei stato molto bravo a spiegare questo argomento e su internet non si trova molto in italiano
Molto chiaro, esempi azzeccati per spiegare l'argomento senza cadere in banalizzazioni! Complimenti
Grandioso, la migliore spiegazione sulla polimerasi mai sentita, complimenti.
Wow,spiegata da dio 😍😍 fanne altri di video ,magari su altre tecniche oppure spiegando anche le varie tipologie di pcr che esistono (pcr classica, qPCR ,real time etc )☺️
Grazie ❤️ appena posso lo farò
Dal momento che non mi fido più ....volevo capire con il reflusso..gastrite...il tampone darà esito positivo visto che rileva un infiammazione...Io ho l'artrite reumatoide quindi i miei esami del sangue mi darebbero un esito positivo..o è tutt'altro tipo di esame che non ci incastra niente ..
È tutto altro tipo di esame perché non misura gli anticorpi
Fantastico!! Sei stato chiarissimo e sono stati sicuramente molto importanti i supporti ultilizzati per fare ben capire cosa accade realmente. Che dire?!?! È stato come tornare in aula durante la lezione di biologia molecolare e comprendere il tutto con molta più serenità .
Grazie per il lavoro svolto...aspetto con curiosità i tuoi prossimi video 😊😊
Bravissimo!!!!! 👏👏👏👏👏 Saper fare non vuol dire saper insegnare.. E tu riesci alla grande in questo. Grazie sei stato molto chiaro
Complimenti! Spiegazione chiara, sintetica e stimolante! Si vede che sei pratico di questa tecnica 😄 Bravissimo, continua così 💪
Grazie mille ❤️
@@VitaAZeroKelvin il testo rt PCR si basa su questo sistema o è un'altra procedura ? Se si , come mai bisogna effettuare il test per forza nella zona rinofaringe?
La polimerasi avviene tramite RNA ossia la sostituzione dell"RNA alla rottura di un'allele cromosomico del DNA difettoso, ma la riparazione non può avvenire se la rottura è di due 'elleli ciò significa che interferisce sulla proteina p53 detta guardiano del genoma che ne inibisce la protezione cromosomica.
L'esperienza sul campo si vede e fa la differenza nella spiegazione! Ottimo contenuto
Bellissimo video, ancora molto attuale e chiaro!!
Sei stato super bravo e super chiaro. Posso chiederti delle informazioni in più riguardo invece la tecnica della MSP(Methylation Specific PCR)? Grazie, ho un esame a breve!
Sto preparando l'esame di stato di biologia e questo video capita a fagiolo grazie!
poco dopo il minuto 3 volevo abbandonare.. sarebbe stato un errore.
Malgrado il tema complesso sei stato molto chiaro! Ottimo video!
Grazie!
Grazie mille, il tuo video è estremamente chiaro. Sto preparando l'esame di biologia molecolare a medicina e la mia professoressa mi sta letteralmente facendo odiare la materia perchè spiega malissimo... ho capito molto più da questo video che dalle sue lezioni...
Wow, l'hai spiegata in maniera fantastica. tutto chiarissimo!!! GRAZIE
Ti faccio i miei complimenti.
Chiarissimo
Molto chiaro. Ti ringrazio molto. Ti ho usato per un ripasso senza sforzo🥰. Da prof. 10+
Da prof a prof 😁
Molto brava, PCR spiegata molto bene a parer mio. Grazie tante!
grazieee ripasso pre-esame veramente utile e chiaro
Bonissima🌹
sei: bravissimo ti prego continua
Grazie, sei stato chiarissimo!
Il video è precedente al covid.... tuttavia è bene chiarire un concetto: la pcr non serve assolutamente a fare una diagnosi, poichè la presenza del virus non è detto che coincida con la malattia. Posso rilevare che è presente un virus, ma posso non essere malato. Nel nostro corpo ci sono miliardi di virus, ma noi non soffriamo di miliardi malattie. Inoltre la tecnica è piuttosto arbitraria.... come si decidono quanto cicli fare? Suppongo quelli sufficienti a identificare il virus... ma c'è un problema: oggi ne fai 40, domani il virus diminuisce e ne fai 50 per vederlo, se ne fai 70 allora tutta l'umanità è malata essendo i virus praticamente ubiquitari. Ad esempio se in inverno faccio il tampone e poi lo processo con la pcr per il rinovirus, il comunissimo virus del raffreddore, vedo che è presente a 40 cicli nel 50% della popolazione, ma solo il 20% ha il raffreddore, il restante 30% si dirà che sono asintomatici di raffreddore perchè il virus è presente? Poi decido arbitrariamente di aumentare i cicli e portarli a 60, il 90% è positivo ma sempre il 20% ha il raffreddore, il restante 70% si dirà che sono asintomatici? Magari quando esce il vaccino, abbasso il numero di cicli di amplificazione portandolo a 20 così dico che il virus è scomparso?? La riflessione qui è sui limiti della pcr e il suo uso ridicolo nei giorni nostri....
Ciao 😊Ho visto solo ora. Interessante 👍Vorrei sapere una cosa: la metodica PCR e' giusta per analizzare il CORONAVIRUS? Grazie
Per la diagnosi molecolare di Sars-Cov-2 si parla di Real Time RT-PCR
Ciao Andrea grazie mille per questo video,mi è servito molto, proprio nel momento esatto,domani sono interrogato sulla pcr, ti ringrazio molto!
Grazie a te, sono contento ti sia stato d'aiuto! 😀
Grazie mille per la spiegazione!!! ☺️
Ho l'esame di biologia molecolare tra poco, sei stato chiarissimo, grazie mille
E complimenti per il (libro?) dei Garbage sullo sfondo
Sono contento di esser stato d'aiuto! E sì, è il libro dei Garbage (This is the noise) 😁💖
Sei chiarissimo e ti faccio complimenti super meritati
Spiegazione davvero chiara e completa. Se potessi approfondire la PCR in situ..
Grande!!! Per quanto riguarda la PCR e la tecnologia Crispr ora, grazie ai tuoi video, ho le idee molto più chiare🤩
Spero un giorno tu abbia interesse e tempo a spiegare la Lamp, continuo a ritrovarmela negli esami ed ancora faccio confusione😱. Per fortuna mai nessun prof all'orale mi ha chiesto di descrivere il processo🤣🤣🤣
Non so quanto mi convenga fare video super specialistici sulle varianti da PCR che a pochissimi interessano però ti preannuncio che sto lavorando per fare un video (decente) sulla Real Time PCR 😜
@@VitaAZeroKelvin ottimo! Sarà certamente interessante 😊
Magnifico grazie Andrea🤩🤩
Grazie, spiegazione chiara e precisa!
PERFETTO!!!! Se spiegassero tutti così 🙏🏻😍🙄
Sei stato chiaro, lampante, cristallino, evidente bye
Sei molto bravo, riusciresti anche a fare un video sulla Real time-PCR per favore?
bella spiegazione
Bravo!!!
Complimenti per il video, bravissimo
Complimenti molto chiaro! Grazie :)
Ciao.... Sec te come si potrebbe fare x farla in laboratorio ma alle superiori? Grazie 1000
Finalmente mi è chiara!!! Grazie mille!!!
sei stato molto chiaro, per alcuni passaggi mi fido, d'altra parte non è la mia materia
Complimenti, veramente chiaro!
E per quanto riguarda i frammenti di acido ribonucleico dei virus?
Super! 💪 uno dei migliori
Ciao, sì sei stato chiaro. Bravissimo
Finalmente ho capito. Grazie
Ciao, video molto interessante.. Una domanda al volo: un mio amico 6 mesi dopo la terza dose vorrebbe fare questo esame. Sei d'accordo?
Sei stato chiarissimo.. Grazie 🙇🏻♀️
Grazie a te 😁
grande, super chiaro!!!
Grazie mille
Complimenti per il video , a quanti cicli è determinata la validità del tampone molecolare per virus corona virus?
Perché sostengono che il tampone non distingua virus febbrili dal corona virus sars cov2? C
Cosa sono i 4 valori osservati con il tampone molecolare?
Che differenza c è tra sars cov 1 e sars cov2? Sono molto simili o complementari ?
Complimenti
A 3:09 c'è un errore: si chiamano desossiribonucleoSidi trifosfato! Ahh maledizione
Ma la temperatura di meltin e di anneling sono la stessa cosa oppure c'è differenza?
Bravissimo!!!
Bravo
sei stato chiarissimo grazie :-) sto preparando ora l'esame di biotech
Felice di esser stato d'aiuto 😀
In bocca al lupo per l'esame!
@@VitaAZeroKelvin grazie mille ho visto che hai un canale superinteressante, mi sono iscritto complimenti!
Scusa ma in ordine di procedura, dopo la PCR, si dovrebbe effettuare prima il sequenziamento o l'elettroforesi su gel?
Beh dipende. Se devi fare una PCR su un campione di DNA che hai appena estratto puoi fare prima una corsa elettroforetica del campione di DNA per vedere se è di buona qualità. Poi se non conosci la sequenza su cui costruire i primer potresti prima voler sequenziare.
Altresì dopo aver fatto la PCR è spesso opportuno controllare i prodotti di amplificazione su gel, e inoltre la PCR può essere uno step preliminare per poi fare sequenziamento. Quindi dipende da quello che devi fare
Ciao, complimenti davvero per la chiarezza, io ho solo una domanda anche molto stupida in realtà, ma è un dubbio che sicuramente saprai togliermi: il frammento di DNA iniziale viene solo replicato e quindi tutte le copie risultanti dalla PCR saranno uguali al frammento iniziale o viene praticamente "esteso" come a voler completare il filamento? Ti prego illuminami!!!
Viene replicato solo nella regione compresa tra i due primer, non viene esteso!
Spiegazione perfetta a mio avviso, grazie mille mi è servita. In futuro dedicherai un video a proposito dell'elettroforesi ?
Tempo permettendo sì. Mi piacerebbe fare qualcosa di speciale per l'elettroforesi una volta finita la quarantena 😍
Bellissimo video. Avrei però una domanda forse banale: al termine della reazione dunque si hanno filamenti singoli o doppi?
Al termine della reazione doppi filamenti!
Bravissimo, ti posso fare una domanda? ... quale e la costruzione di primer eterologhi?
Per primer eterologhi intendi primer che vadano ad amplificare geni simili di organismi diversi?
bravissimo
Ciao. Ottimo video. Mi hai chiarito molte cose però alcuni aspetti non li ho ben compresi... Ti sarei grato se mi rispondessi.
Quindi per effettuare la PCR dobbiamo conoscere in tutto e per tutto il DNA da replicare perché bisogna fornire determinati primers affinché il DNA venga replicato giusto?
Basta conoscere solo le sequenze alle estremità su cui si costruiranno i primer, non è necessario conoscere anche la sequenza intermedia
Ok ok, ora ho capito. E com'è che si arriva a conoscere tali sequenze iniziali e terminali? Grazie intanto per la tempestiva risposta
Dipende! In alcuni casi conosci l'intera sequenza (ad esempio dopo un sequenziamento). In altri casi la sequenza all'estremità puoi averla apportata tu opportunamente (ad esempio con un clonaggio). Oppure se non hai affatto la sequenza dell'organismo in questione ma conosci quella di organismi simili puoi costruire primer su quelle e lavorare in condizioni meno stringenti. Le possibilità sono tantissime.
@@VitaAZeroKelvin perfetto ti ringrazio. Sto effettuando un anno di specializzazione per diventare enotecnico e l'esame finale prevede una la discussione di una tesi. Sto portando avanti una tesi sull'utilizzo della PCR nel mondo della viticoltura e dell'enologia e grazie ai tuoi video sto chiarendo molti dubbi di base che avevo sulla PCR. Perché limitarsi a leggere su Wikipedia il processo capisci limitatamente rispetto a video e spiegazioni. Ti ringrazio ancora per le tue risposte, un saluto.
@@matteofrancescon6074 se hai altri dubbi chiedi pure. In bocca al lupo 😁
Bel video, molto esaustivo! Avrei però bisogno di un'informazione..Sapresti spiegarmi cosa si intende per booster e nested Pcr?
Grazie!
Booster non l'avevo mai sentita, mi documenterò! Nested PCR dovrebbe essere una PCR in cui si eseguono due amplificazioni successive: nella prima si utilizzano un primer forward e un reverse alle estremità di una sequenza; il prodotto ottenuto da questa amplificazione, viene utilizzato come stampo per una seconda amplificazione nella quale si utilizza una seconda coppia di primer forward e reverse però diversi da quelli utilizzati nella prima amplificazione e, più specificamente, interni alla sequenza amplificata nella prima amplificazione.
Tutto questo serve per ridurre problemi di amplificazioni aspecifiche ottimizzando le rese, perché si ottengono le rese di due reazioni di PCR ma con una specificità ben più elevata a causa dell'utilizzo di due coppie di primer diversi.
Talvolta, nella seconda reazione, invece di usare una coppia di primer completamente diversa, si può utilizzare uno solo dei due primer più interno e l'altro primer invece è in comune con la prima reazione.
Per più info: en.wikipedia.org/wiki/Nested_polymerase_chain_reaction
@@VitaAZeroKelvin Grazie! Sei stato super chiaro!
Bravissimo bel video!
Ho una domanda da farti riguardante l’efficienza, alcune formule dicono che il numero di DNA replicati si può trovare facendo Qi(1+x)^n dove Qi=quantità iniziale di DNA, x=efficienza amplificazione, n= numero di cicli effettuati, altre formule dicono Qi(1+x)^(n-1)
Qual è la formula esatta?
Va bene la prima formula. Dove hai trovato la seconda?
Tieni presente che dipende tutto dalla x della tua equazione, che va determinata sperimentalmente ed è unica per coppia di primer, natura del campione e condizioni di reazione.
@@VitaAZeroKelvin Grazie mille! La seconda formula l'ho trovata in alcune slides caricate su google immagini.
Bravissimo, sarebbe utile anche un video sulla Reverse Transcriptase-PCR e Real Time-PCR
Ci sto pensando 🙂
Domanda: i primer devono legarsi esattamente con l'inizio del filamento di RNA o possono farlo anche, per esempio, a metà filamento?
I primer devono legarsi dal punto in cui vuoi che inizi / termini la copia
@@VitaAZeroKelvin Ok, grazie.
Grazie😊
Quindi se volessi usarla per la diagnosi di HIV, ad esempio, devo aggiungere le sequenze già preparate da laboratorio al campione del paziente?
Sì, si usano dei primer specifici per il materiale genetico virale 🙂
@@VitaAZeroKelvin perfetto, grazie infinite per il video e per avere risposto 😀
scusa le tante domande ma mi interessa molto l'argomento. una cosa quanto è precisa la reazione di un primer dopo che è stata divisa la doppia elica ? da come vedo nel video tu spieghi che il primer funge da TARGET, cioè si lega al singolo filamento immagino a quello del virus e poi l'enzima termostabile estende il dna ricomponendo la sequenza dato che ci sono i nucleotidi liberi che fanno reazione , quindi alla fine del ciclo hai nuovamente la doppia elica che verrà nuovamente divisa al ciclo successivo creando altre copie. ora mi chiedo ma il covid è talmente specifico che il primer si attacca solo ad esso ? cioè se lo scopo è amplificare il dna virale del covid il primer può attaccarsi per sbaglio ad altro ? tipo ad altri corona virus che non c'entrano niente ? o al dna di un batterio qualsiasi ? quanto universalmente questa tecnica è ritenuta precisa ?
Questa è una bella domanda, però la risposta è "dipende". La tecnica può essere più o meno precisa a seconda dei casi. Quello che puoi aspettarti però è che nei test diagnostici collaudati, lì dove si conosce la sequenza del patogeno, il test è molto specifico. Negli ambiti di ricerca, lì dove magari non si conoscono ancora le tante variabili di un fenomeno o non si conosce del tutto la sequenza bisogna lavorare di più giocando con le condizioni di temperatura, le concentrazioni di reagenti, e le sequenze dei primer per poter trovare la combinazione adatta.
È una tecnica dagli utilizzi così vasti e vari che dare una risposta univoca è impossibile.
@@VitaAZeroKelvin ma la sequenza del covid è conosciuta precisamente tanto da ottenere un primer efficace ?
@@VitaAZeroKelvin ma nel momento in cui prelevi del materiale genetico dalla saliva, come fa il macchinario a dividerlo ? cioè io nella saliva ho varie cose come becca proprio quel dna specifico al quale poi il primer si attacca ? c'è una suddivisione che avviene prima, cioè prima prelevo il materiale dalla saliva, poi separo le varie componenti e poi inizia il ciclo termico ? oppure il primer ha una funziona di target già prima che il ciclo inizia ?
Salve ma i cicli per il r t prc per corona virus ,vero che il dato oltre i 25 cicli non è affidabile, come indicato anche dall'oms?
@@eugeniabavastrelli2472 entro i 25 qualche cosa esce altrimenti si rischiano errori credo. Ma non credo che la pcr è un metodo diagnostico non puoi sapere se il virus si sta replicando se sei ammalato o se ti ammalerai. Rileva specifici geni associati alle proteine virali.
Ciao ottima spiegazione complimenti. Senti per cortesia potresti spiegarmi cos'è il plateau ? grazie
È la fase in cui l'amplificazione rallenta e la curva dei prodotti di PCR nel tempo non è più esponenziale ma si appiattisce
@@VitaAZeroKelvin ok , però non riesco a capire come mai si appiattisce , a cosa è dovuto quest'appiattimento, qual'è il motivo ?
@@antoniobettino7510 Ci sono vari motivi: è che i primer iniziano a scarseggiare, la taq polimerasi essendo sotto stress perde di funzionalità, e abbondando le sequenze di amplificato esse tendono a riappaiarsi tra di loro piuttosto che appaiarsi ai primer durante la fase di annealing.
@@VitaAZeroKelvin ah ok perfetto capito , grazie mille gentilissimo e scusami il disturbo 🙂buona giornata
@@antoniobettino7510 nessun disturbo!
Ma come fa la DNA polimerasi a fermarsi proprio nel punto giusto per fare il frammento target ???
Scusa magari dico una sciocchezza Questa tecnica PCR non può essere utilizzata nei tribunali? Ad esempio la replica del DNA di Ignot 1 nel processo per la morte di Yara Gambiasio.. Se non vado errato non era una prova replicabile l'analisi del DNA di Ignoto1 Non avrebbero potuto attraverso la PCR del campione di DNA di Ignoto 1 avere molti più campioni per effettuare ulteriori verifiche? non potevano sequenziare il campione attraverso il computer per avere un ulteriore modello di confronto? Grazie
Infatti la PCR si utilizza anche sulle scene del crimine ma anche per i test di paternità per fare quello che si chiama fingerprinting del DNA in cui si amplificano sequenze che da individuo a individuo hanno una lunghezza molto variabile. Analizzandone un numero cospicuo si crea un vero e proprio codice identificativo di una persona. Ma non è che immettendo questi dati in un database ti rivela esattamente nome e cognome di quella persona. Non so se mi spiego o se ho risposto alla tua domanda
@@VitaAZeroKelvin infatti...mi sa che stano rubando dati genetici con la scusa "coronavirus"... e preparano armi biologiche...
Ma se ho una molecola di DNA lineare a singolo filamento, è comunque necessario il processo di denaturazione?
Sì, anche perché sarà a singolo filamento solo nel primo ciclo
Ciao... Bella spiegazione... Io ancora non ho capito una cosa... Mettiamo il caso debba identificare un batterio in un campione di sangue che mi serve avere milioni di copie di una determinata sequenza genica?
Non capisco ancora di questa tecnica cosa mi seve avere tante copie... Mbo
Giusta osservazione. La risposta è che la PCR in questo senso non è una tecnica analitica in sé: dopo la PCR bisogna fare un'elettroforesi su gel di agarosio del prodotto di reazione. In poche parole si osserverà una banda sul gel solo se nel campione iniziale era presente del DNA del batterio su cui tu hai fatto la PCR e la distanza di migrazione della banda sarà proporzionale all'ampiezza del frammento amplificato. La PCR serve appunto per ottenere abbastanza materiale da poterlo osservare su un gel. Se non sai cos'è o come si fa l'elettroforesi su gel allora dammela per buona e quando tornerò a fare video ti risponderò più nel dettaglio 😅
Ah ok... Ma vale anche per la pcr-real time?... Scusa se ti rompo..
@Piter Graus no, la PCR real-time si chiama così proprio perché ti permette di osservare l'avvenire della reazione in tempo reale. Dopo la reazione si può anche non fare l'elettroforesi, è il macchinario che conduce la reazione che ti permette di osservare la formazione di prodotto in base all'aumento di fluorescenza, che può essere ottenuto in vari modi.
vorrei un chiarimento...... visto che si eseguono dei cicli, non credo si possa andare ad un numero di cicli molto elevato in quanto, prima o poi verrebbe fuori un falso positivo.......quindi quale è il numero di cicli masimo per evidenziare un positivo e non un falso?
Mah non c'è un ciclo massimo, dipende sempre dal materiale di partenza e dal risultato che si vuole ottenere. Comunque nelle indagini successive, facendo un'elettroforesi su gel di agarosio oppure facendo quella che si chiama nested PCR è possibile osservare l'eventuale presenza di prodotti aspecifici con maggiore precisione. Di certo se uno vuole sapere con certezza se c'è il prodotto desiderato o se sono prodotti aspecifici bisogna procedere con saggi di ibridazione o ricorrere a una qPCR.
la PCR viene usata anche nella produzione dei vaccini??
Che io sappia, la PCR può essere sfruttata nel controllo qualità per quantificare un vaccino qualora si basi su germi attenuati o inattivi.
Poi ha così tanti utilizzi che probabilmente si usa anche in altri passaggi durante la produzione e il controllo qualità dei vaccini 🙂
Bravissimoooooo
Ciao adoro i tuoi video, puoi farne uno sul wester blot???
Western
Aggiunto alla lista 💖
Ma prima di mettere la provetta nel termociclatore, cosa c’è dentro alla provetta ????
L'hai visto il video? :D
Dove hai studiato biologia , sei bravissimo
Alla Federico II di Napoli, grazie 🙂
Vita A Zero Kelvin oltre alle tue spiegazioni mi consigli qualche libro per studiare questi argomenti
Un qualsiasi libro di tecniche di biologia molecolare 🙂
grazieeeeeeeeeeee
vorrei una spiegazione in merito a questo test PRC. prima di tutto come fa il tecnico ad isolare la molecola che gli serve, o meglio se deve partire dal dna virale per poi sottoporlo a questo processo, come lo isola prima di dividerlo e amplificarlo ? non essendo del mestiere mi sembra davvero impossibile che si riesca dalla saliva a isolare quel dna che si vuole controllare e poi amplificarlo. non è contaminata la saliva con virus piu' disparati ? e poi una volta che abbiamo un dna presumibilmente da controllare, come si può scegliere una regione ? dal video spieghi che i primers servono a creare un inizio e una fine , ma ad ogni ciclo che succede ? crei pezzi di dna sempre diversi che poi controlli ? onestamente per una persona che non ha studiato scienze è davvero troppo complesso da capire. chiederei chiarimenti grazie.
La tecnica si fa su un campione di DNA che è stato precedentemente estratto e purificato. Se ti interessa sapere come, la tecnica si chiama proprio estrazione del DNA. La PCR è una tecnica molto sensibile: bastano pochi nanogrammi di DNA con la sequenza bersaglio per ottenere l'amplificazione. La biologia molecolare è un po' come la magia, è sorprendente anche per questo, ma per chi ci lavora è molto più concreta di quanto immagini.
Una volta estratto il DNA e allestita la reazione di PCR, saranno i primer che utilizzerai a scegliere la regione. Si attaccano secondo le regole della complementarità tra nucleotidi (A con T, C con G). Se trovano un appaiamento perfetto (o quasi) la reazione parte e ad ogni ciclo si ottengono due copie del frammento compreso tra i due primer. Ad ogni ciclo le copie del frammento di interesse raddoppiano, dunque sono tutti pezzi di DNA uguali.
Il risultato si controlla poi mediante elettroforesi o altri metodi.
Siccome me lo chiedi in merito a Covid, sappi che SARS-CoV-2 è un virus a RNA, quindi la procedura di diagnosi molecolare è un po' diversa e richiede una variante della PCR che si chiama Real-time RT PCR. In sostanza comunque a te non importa che insieme all'RNA del virus tu possa aver estratto anche RNA umano o di batteri, a patto che come primer tu scelga sequenze che trovano complementarità solo e soltanto sul materiale genetico del virus e non dell'uomo o di altre specie.
Per farti un banale esempio e rispondere anche alla domanda di prima, si ottengono falsi negativi quando nel campione c'è il virus ma la tecnica non lo amplifica. Tipo se il campione è di scarsa qualità, se c'è troppo poco materiale da amplificare, o se la reazione non è stata condotta correttamente. Si ottengono falsi positivi quando nel campione non c'è il virus ma si ottiene comunque un amplificato. È il caso in cui i primer si attaccano su regioni di DNA umano o di batteri in maniera aspecifica.
@@VitaAZeroKelvin non ho ben capito. ma quando il macchinario amplifica, cosa amplifica il dna di una singola cellula, o tutto quello che trova ? non ripulite il materiale per amplificare il dna presumibilmente del virus ? e poi il primer è una sostanza che si può attaccare a qualsiasi dna ? cioè come dici tu se si attacca ad un dna che non c'entra niente con il covid cosa succede ? c'è il rischio che la sequenza sia simile al covid e quindi tu risulti positivo ? non dovrebbero essere univoche queste sequenze ? cioè se tu prendi la sequenza del virus , il macchinario è in grado su milioni di copie a farti un confronto ?? cioè ti dice che quella stringa è uguale ? e su ogni ciclo cosa ottieni ogni volta sequenza diverse partendo dallo stesso dna iniziale ?
Infatti io ti ho detto che si scelgono come primer sequenze che trovano complementarità solo e soltanto sul bersaglio che si vuole amplificare, quindi sì, sono sequenze uniche.
In ogni ciclo non si ottengono sequenze diverse, ma tante sequenze uguali (copie, appunto) al bersaglio che stai amplificando con i primer.
@@VitaAZeroKelvin levami la curiosità ma il primer si attacca ad un particolare dna ? cioè quello che tu chiami bersaglio, cosa sarebbe ? cioè il primer fa in modo da legarsi solo al dna presumibilmente virale ? non comprendo come si può ottenere con tanta precisione un legame con tanto materiale nel tampone. vuol dire che si lega solo al particolare dna del covid ? non mi è chiaro in concetto di primer. è una sostanza particolare che ha un legame con quel particolare dna virale ?
😍
Questo viene usato anche per il covid 19?
Una variante più complessa che prende il nome di Real Time RT-PCR
@@VitaAZeroKelvin ho sentito all'inizio della pandemia che veniva usato per il covid 19...dicevano che non va bene deve essere fatto per altri esami..
@@robertafogli463 ma no, quella variante che ti ho detto va bene ed è quella che si utilizza sui tamponi nasofaringei
@@VitaAZeroKelvin Scusa la mia ignoranza ..se una persona soffre di gastrite..reflusso con il tampone può dare la positività??Io ho l'artrite reumatoide può influire sull'esame del sangue per il covid.??
@@robertafogli463 queste sono purtroppo informazioni mediche, io sono un biologo 😔
NON é per la diagnosi ,,,,,,,lo ha detto MULLIS ATTENZIONE
Ma che vuol dire?
cosa determina un falso negativo o un falso positivo ? altra domanda ma come fate ad assere certi che quella sequenza che cercate non sia presente in altri virus dello stesso tipo ?
Stai parlando della PCR in generale o della diagnosi di Coronavirus?
@@VitaAZeroKelvin parlo del covid. Prima di tutto come isoli dalla saliva la molecola di RNA presumibilmente virale che poi tratterai con i reagenti x permettere al macchinario di duplicarla? E come la confronti con il dna virale del covid ?
@@jpcapobianco1979 non puoi
Ciao,
pui spiegare come avviene un tampone per il covid? RT PCR?
Quello molecolare sì, avviene per RT-PCR. In realtà è una variante quantitativa della reazione in cui si misura in tempo reale l'avanzamento della formazione di prodotto. Si chiama anche Real-Time RT-PCR o RT-qPCR.
@@VitaAZeroKelvin hai viseo in merito?
Non ancora 🙂
Comunque sinceri complimenti e auguri per tutto.
grandissimo !
Vorrei capire ...APCR è giusto per il covid??Ho il sospetto che questo esame a prescindere da quasi a tutti positivo...
Per il coronavirus si fa una real-time RT-PCR per amplificare RNA virale su tamponi orofaringei. Come tutte le altre tecniche diagnostiche può avere un margine di errore, per questo il test si ripete più volte.
I love You
Come si creano i primer?
Mediante un processo chimico di sintesi di oligonucleotidi. Non so su cosa si basa, dovrei ricercare, dal momento che lo fanno le case produttrici dei primer e non i laboratori di biologia in cui si utilizzano.
@@VitaAZeroKelvin non sarebbe meno costoso e molto più produttivo se gli stessi laboratori di biologia lo facessero? Sono interessato molto alla produzione dei primer. Sarebbe davvero bello se facessi un video su questo :) Un saluto
La sintesi dei primer è un processo chimico più che biologico. Per questo ci sono delle ditte che lo fanno appositamente. Se ogni laboratorio dovesse procurarsi tutti i reagenti di per sé dovrebbe possedere molti più strumenti costosi e togliere tempo alla ricerca per produrre reagenti che magari, ordinati da una ditta, costano pochi euro. C'è chi lo fa, comunque, non so di chi si sintetizza i primer, ma so di chi si produce la taq polimerasi, la Cas9, i tamponi per condurre le reazioni, tutto nel proprio laboratorio o in laboratori con cui collaborano, nell'ottica del risparmio.
@@VitaAZeroKelvin Sarebbe ottimo sapere i nomi di questi scienziati, i materiali necessari e le procedure :D
@@Diegorussod.r ah se è per questo io ho svolto il periodo di tesi in un laboratorio che sintetizzava Cas9 per poi utilizzarla. 😁 Se hai un plasmide con il gene che codifica per la proteina di tuo interesse puoi farla esprimere e poi purificarla con una cromatografia, è relativamente semplice e poco costoso se sei pratico con la biochimica.
Veramente molto utile, sembra che hai copiato la lezione dal mio professore hahaha
Grazie :)
I Garbage
MATURITÀ 2020!
bravo ma vai in extrabeat, per seguirti bene ti devo mettere a 0,5x , qualche volta fermati per respirare
40 cicli
Non ho capito ? Hai parlato di uso ai fini diagnostici? Ma il premio Nobel non ha dichiarato che non è una tecnica quantitativa? Infatti sentire parlare di carica virale è errato perché il PCR misura la qualità infatti Muller diceva che parlare di PCR di controllo quantitativo è un "ossimero" ovvero contrapposizione di termini. In parole semplici questi controllo covid con il PCR con cicli di oltre i 35 cicli è un fatto assurdo.
Io non ho mai parlato di Covid-19, tant'è che non esisteva ai tempi in cui ho fatto questo video. Comunque la PCR esiste anche in varianti quantitative, come la real-time PCR, e semi quantitative. Viene utilizzata per diagnosticare patologie ereditarie, come la sindrome di Duchenne.
Chiarissimo bravo!!!
bravissimo