Спасибо за интересный ролик. Всегда полезно посмотреть чужой опыт. Сама ставлю ИФА более 20 лет, и некоторые моменты меня смутили. 1. Перед началом анализа лучше записать схему планшета на бумаге. Легко запомнить, когда 2 стрипа, а когда в работе 2 планшета и более, легко запутаться. И на рамке планшета тоже лучше сделать надпись - какой аналит в работе. 2. Переставлять стрипы в другую рамку тоже не рекомендую, т.к. если это рамка другого производителя стрипы встают неплотно и могут вылететь в процессе. Лучше рабочие стрипы оставить в рамке, а нерабочие сложить в пакет. И главное не выбросить рамку в конце анализа))). Я еще с краю заклеиваю края стрипа скотчем, если ставлю в «неродную» рамку. 3. Концентрат ФСБ-Т, если в нем есть кристаллы, обычно рекомендуют прогреть в термостате до полного их растворения, обычно минут 10-15, как раз пока выдерживаем остальные компоненты при комнатной температуре. 4. Не рекомендую разводить весь объем концентрата ФСБ-Т, если работаешь с частью набора. В инструкциях обычно есть расчеты объемов в зависимости от количества используемых стрипов. Стаканы с рабочим разведением ФСБ-Т занимают место в холодильнике. 5. Совет из 90-х годов, для экономных: если раскапывать калибраторы от меньшей концентрации к большей можно использовать один наконечник. Для КС только новый наконечник. 6. Конъюгат и раствор хромогена тоже лучше отмерять дозатором при внесении в ванночки. Переливать остатки из ванночки обратно во флакон очень опасно. В инструкции обычно есть таблица расчета для этих компонентов в зависимости от количества использованных стрипов. 7. Обычно число промывок не зависит от способа промывки: вручную или вошером. При ручной промывке лучше стряхивать содержимое лунок в раковину при включенной проточной воде. Меньше вероятность загрязнения стенок раковины биологическим материалом, который считаем потенциально опасным. 8. Для хромогена использую отдельную ванночку, мою ее дистиллированной водой и перед использованием протираю спиртом. 9. Подготовить Стоп-реагент и настроить спектофотометр можно в тот момент пока идет инкубация с хромогеном. 10. Рекомендую при измерении оптической плотности обязательно использовать референс-волну, всякие казусы бывают. И еще посоветую визуальный контроль результатов измерения и степени окрашивания в лунках. Техника может сбоить. А так большое спасибо.
Людмила, добрый день! В поисках ответов на свои вопросы наткнулась на Ваш комментарий, спасибо за интересные дополнения. У меня вопрос про пункт 10. В каких-то ИФА наборах в инструкции указано, что "измерить оптическую плотность на длине волны ххх", а в других " измерить оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме: основной фильтр - ххх нм, референс-фильтр - ххх нм". 1) Почему так и в чём разница? 2) Это должны быть разные ИФА-ридеры или можно поставить в таких форматах на одном? Заранее благодарю за ответ.
3мин. 12сек - Зачем оставшиеся стрипы пленкой заклеивать??? Пленка используется во время проведения реакции, а не для хранения. В этом фольгированном пакетике находится влагопоглатитель, стрипы должны быть открыты во время хранения.
Тут проводят конкретно калибровку теста, для определения его пригодности и точности. То есть при реальном тесте, например на антиген вируса, вместо калибровочных проб будет уже использоваться исследуемая сыворотка крови (в каждую лунку своя проба).
Поскольку подобные ролики появляются в сети, я бы отнес их к категориям «Как не стоит проводить ИФА». • Плотную посадку наконечников обеспечивают только на стадии внесения ТМБ. А при надевании наконечников нужно убедиться в одинаковой высоте посадке наконечников на все посадочные конусы многоканального дозатора. • Объемы растворов вносят в лунки прямым дозированием, а не обратным. Т.е. нельзя говорить о точности дозирования во все лунки. • Стрипы не закаливаются адгезионной пленкой на стадии внесения ТМБ. • Также не засекается время от начала внесения ТМБ в первый стрип. • Оператор на протяжении выполнения всего процесса постановки ИФА жестикулирует над открытыми растворами, ванночками и стрипами. Зато при внесении ТМБ голос за кадром «Используем чистую ванночку, чистые наконечники. Если попадет небольшая соринка, то ТБМ раствор сразу выкидываем!»))).
@@BorisVGlazov или Борис Выньглазов, где ссылка на видео мастер-класса от вас? Или только никнейм можем менять? И ещё - пишите грамотно ( (с)А при надевании наконечников нужно убедиться в одинаковой высоте посадкЕ(!!!) наконечников на все посадочные конусы многоканального дозатора.) Так вот, Борис_0_Глеб, судя по всему этому - Вы (хотя нет, правильно будет ты) - тролль, не достойный дальнейшего общения (а еще лучше лучше не позорься и не комментируй то, в чем ты ноль). За сим, ЛЮБОЙ твой ответ приму как твоё поражение, но, в качестве утешения тебя, советую прочитать "Теория и практика иммуноферментного анализа" Егоров А.М., Осипов А.П.
Спасибо за интересный ролик. Всегда полезно посмотреть чужой опыт. Сама ставлю ИФА более 20 лет, и некоторые моменты меня смутили.
1. Перед началом анализа лучше записать схему планшета на бумаге. Легко запомнить, когда 2 стрипа, а когда в работе 2 планшета и более, легко запутаться. И на рамке планшета тоже лучше сделать надпись - какой аналит в работе.
2. Переставлять стрипы в другую рамку тоже не рекомендую, т.к. если это рамка другого производителя стрипы встают неплотно и могут вылететь в процессе. Лучше рабочие стрипы оставить в рамке, а нерабочие сложить в пакет. И главное не выбросить рамку в конце анализа))). Я еще с краю заклеиваю края стрипа скотчем, если ставлю в «неродную» рамку.
3. Концентрат ФСБ-Т, если в нем есть кристаллы, обычно рекомендуют прогреть в термостате до полного их растворения, обычно минут 10-15, как раз пока выдерживаем остальные компоненты при комнатной температуре.
4. Не рекомендую разводить весь объем концентрата ФСБ-Т, если работаешь с частью набора. В инструкциях обычно есть расчеты объемов в зависимости от количества используемых стрипов. Стаканы с рабочим разведением ФСБ-Т занимают место в холодильнике.
5. Совет из 90-х годов, для экономных: если раскапывать калибраторы от меньшей концентрации к большей можно использовать один наконечник. Для КС только новый наконечник.
6. Конъюгат и раствор хромогена тоже лучше отмерять дозатором при внесении в ванночки. Переливать остатки из ванночки обратно во флакон очень опасно. В инструкции обычно есть таблица расчета для этих компонентов в зависимости от количества использованных стрипов.
7. Обычно число промывок не зависит от способа промывки: вручную или вошером. При ручной промывке лучше стряхивать содержимое лунок в раковину при включенной проточной воде. Меньше вероятность загрязнения стенок раковины биологическим материалом, который считаем потенциально опасным.
8. Для хромогена использую отдельную ванночку, мою ее дистиллированной водой и перед использованием протираю спиртом.
9. Подготовить Стоп-реагент и настроить спектофотометр можно в тот момент пока идет инкубация с хромогеном.
10. Рекомендую при измерении оптической плотности обязательно использовать референс-волну, всякие казусы бывают. И еще посоветую визуальный контроль результатов измерения и степени окрашивания в лунках. Техника может сбоить.
А так большое спасибо.
Спс .А можно во время читка в компиютер добавлять контроль _+(если ани низкий по ошибкой во времия работа??
Людмила, добрый день! В поисках ответов на свои вопросы наткнулась на Ваш комментарий, спасибо за интересные дополнения. У меня вопрос про пункт 10. В каких-то ИФА наборах в инструкции указано, что "измерить оптическую плотность на длине волны ххх", а в других " измерить оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме: основной фильтр - ххх нм, референс-фильтр - ххх нм". 1) Почему так и в чём разница? 2) Это должны быть разные ИФА-ридеры или можно поставить в таких форматах на одном? Заранее благодарю за ответ.
Спасибо вам большое за то что снимаете такие видео!
3мин. 12сек - Зачем оставшиеся стрипы пленкой заклеивать??? Пленка используется во время проведения реакции, а не для хранения. В этом фольгированном пакетике находится влагопоглатитель, стрипы должны быть открыты во время хранения.
Было бы интересно узнать дозировку отмывочного раствора
Работаю на ветеринарных наборах ИФА системы биочек, слава богу таких сложностей нет. Все готовое, и плашек намного больше.
Снимите видео по постановке гормонов щитовидной железы
Спасибо большое
Супер спасибо !
Спасибо❤️
Оставшиеся стрипы плёнкой заклеили,зачем?
по отдельным болезням (вирусам) такая же сложная процедура?
Тут проводят конкретно калибровку теста, для определения его пригодности и точности.
То есть при реальном тесте, например на антиген вируса, вместо калибровочных проб будет уже использоваться исследуемая сыворотка крови (в каждую лунку своя проба).
Разве можно соединить два этапа: инкубацию сыворотки и реакцию с коньюгатом в один этап? все нормальные ELISA делаются в 3 или 4 этапа.
Поскольку подобные ролики появляются в сети, я бы отнес их к категориям «Как не стоит проводить ИФА».
• Плотную посадку наконечников обеспечивают только на стадии внесения ТМБ. А при надевании наконечников нужно убедиться в одинаковой высоте посадке наконечников на все посадочные конусы многоканального дозатора.
• Объемы растворов вносят в лунки прямым дозированием, а не обратным. Т.е. нельзя говорить о точности дозирования во все лунки.
• Стрипы не закаливаются адгезионной пленкой на стадии внесения ТМБ.
• Также не засекается время от начала внесения ТМБ в первый стрип.
• Оператор на протяжении выполнения всего процесса постановки ИФА жестикулирует над открытыми растворами, ванночками и стрипами.
Зато при внесении ТМБ голос за кадром «Используем чистую ванночку, чистые наконечники. Если попадет небольшая соринка, то ТБМ раствор сразу выкидываем!»))).
Снимите свое видео как правильно нужно ставить. Покажите класс!
@@ЮрийБулеев , обязательно!
@@BorisVGlazov или Борис Выньглазов, где ссылка на видео мастер-класса от вас? Или только никнейм можем менять? И ещё - пишите грамотно ( (с)А при надевании наконечников нужно убедиться в одинаковой высоте посадкЕ(!!!) наконечников на все посадочные конусы многоканального дозатора.)
Так вот, Борис_0_Глеб, судя по всему этому - Вы (хотя нет, правильно будет ты) - тролль, не достойный дальнейшего общения (а еще лучше лучше не позорься и не комментируй то, в чем ты ноль). За сим, ЛЮБОЙ твой ответ приму как твоё поражение, но, в качестве утешения тебя, советую прочитать "Теория и практика иммуноферментного анализа" Егоров А.М., Осипов А.П.
Снимайте расчеты