Mammalian cell Transfection

[@rangeo8783]

감사히 잘 보았습니다.

[@CDRTtube]

시청해주셔서 감사합니다. 수행 하시는 모든 연구에서 좋은 성과가 나오시기를 기원합니다.

[@JangBBi]

혹시 transfection 후에 1~3일간 배양하라고 하셨는데 이 때 배양 시간에 따른 transfection 정도의 차이가 많이 큰 편인가요?
1일만 배양해도 transfection이 잘 되었다는 유의한 결과를 얻을 수 있는지 궁금합니다

[@CDRTtube]

안녕하세요
질문 주셔서 감사드립니다
Transfection에 사용하시는 벡터의 종류 및 유전자 특징에 따라 transfection후 초기 발현 시간이 달라질수 있습니다.
열두시간이상 부터 유전자 발현 패턴이 확인 되는 경우도 많이 있으니까요
따라서 연구 하시는 대상 유전자 및 사용하시는 발현 벡터의 특징에 따라 관찰시간을 정하시면 됩니다
저희도 일부 실험에서는 transfection 후 12 시간 이후부터 모니터링을 시작 하는 경우도 많이 있습니다
추가로 궁금하신 사항 있으시면 언제라도 말씀해 주세요
감사합니다 ^^

[@호두부-p6p]

정말 잘 봤습니다. 감사합니다.

[@CDRTtube]

부족한 영상 시청해 주셔서 감사드립니다. 수행하시는 연구에서 모두 좋은 성과 나오시기를 기원합니다. ^^

[@kimjames1769]

좋은 영상 감사합니다! 참고하겠습니다.

[@CDRTtube]

시청해 주셔서 감사합니다. 혹시나 궁금하신 점이 있으시면 언제라도 질문 해 주세요. 수행하시는 연구 모두 좋은 결과 나오시기를 기원하겠습니다.~ ^^

[@구교진-n9o]

마지막에 transfection reagent dish에 뿌릴 때, cell culture medium도 Opti-MEM 인가요?

[@CDRTtube]

안녕하세요 구교진 선생님.
영상에 관심을 가져 주심에 깊은 감사드립니다.
이번 영상에서 사용한 시약은 Lipofectamin 3000으로서 DNA와 Lipofectamin complex를 만들때만 Opti-MEM media를 사용하고, 15분간 반응이 완료되어 세포에 투여할때는 일반 세포 배양하시던 media에 직접 투입하시면 됩니다. 기존에 Lipofectamin 사용할때는 6~8시간 정도 OPTI-MEM에 DNA-lipofectamin complex를 넣고나서 그 뒤 일반 세포 배양용 배지로 바꿔줘야 했었는데 Lipofectamin 3000은 그런 번거로운 작업 없이 바로 사용하시던 일반 배지에 DNA-Lipofectamin 3000 complex를 넣으시면 됩니다.
Transfection 효율도 세포 상태만 좋으면 잘 나옵니다.
혹시라도 추가적인 질문 있으시면 언제라도 환영합니다.
하시는 연구 모두 좋은 결과 나오시기를 기원드립니다.
감사합니다.

[@masterwannabe1029]

혹시 세포가 너무 confluent 해도 transfection efficiency에 영향을 미칠까요? 이번에 했을때 60% 정도 밖에 안 나왔더라고요;;

[@CDRTtube]

안녕하세요
영상 시청해주셔서 감사합니다
세포의 confluency는 transfection 효율에 큰 영향을 미칩니다.
세포가 너무 붙어있게 되면 extracellular matrix 구조 등이 변화되어 외부 유전자가 잘 안들어가는 세포들도 상당히 많으니까요.
좋은 결과 많이 도출되시기를 기원합니다. ^^

[@또-q7y]

배양액에 10% fbs를 넣어 키웠었는데 serum-free로 바꿔주지 않고 함량 그대로 넣어주어도 되는건가요?

[@CDRTtube]

안녕하세요~ 질문 감사드립니다.
예전에 사용하던 transfection reagents 는 cell synchronize 또는 transfection 효율을 올리기 위해 serum free media 등을 활용했습니다. 최근 개발된 transaction reagents는 연구 목적에 따라 serum free media를 사용하는 목적을 제외하고, 그런 제한이 없는 제품들이 많습니다.
예를 들면 lipofectamine 3000 의 경우 제조사 protocol에 아래와 같이 명시되어 있습니다~
Make DNA-Lipofectamine™ 3000 complexes in serum-free medium such as Opti-MEM™ Reduced Serum Medium and add directly to cells in culture medium, in the presence or absence of serum/antibiotic.

[@또-q7y]

@@CDRTtube 답글 감사드립니다! 제가 잘못 질문 드린것 같아서요, 저는 complex를 lipofectamine rnai 로 opti-mem에 만들고 나머지 volume을 serum-free media로 채워주는데 세포가 많이 죽어서, 이 media를 10% fbs를 넣어 채워주어도 transfection 효율에는 큰 변화가 없을지 여쭤보고싶습니다..! siRNA를 낭비할까봐 걱정이 되네요ㅠㅠ

[@CDRTtube]

@@또-q7y 저희의 경우 lipofectamine RNAiMax 사용시 complete media를 사용하고 있습니다.
siRNA 와 lipofectamine mixture를 만들때 주의할 경우 이후 단계에서 serum free와 complete media의 차이는 최대 5% 이내 정도로 생각됩니다.
꼼꼼하고 자신있게 진행하시면 좋은 결과 나오시리라 생각됩니다.
언제라도 긍금하신 점은 질문주세요~ ^^