Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR): Conceptos Básicos
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- Опубликовано: 4 янв 2018
- Principios básicos de la Reacción en Cadena de la Polimerasa
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Наука
Es la mejor explicación que he visto en toda la red ..felicidades .
Gracias por el el tiempo y trabajo que pusiste en el.video, sirve de mucho
muchísimas gracias, entendí los conceptos mucho mejor. Espero que siga :) un saludo
Gracias, explicaron todo
Muchas gracias, este material me fue de mucha ayuda para rememorar correctamente la técnica
Qué chido está tu video. Desde hace tiempo andaba buscando algo así. Gracias!
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Eres el Mejor 🍋💛
te amo!! jajaja fue de mucha ayuda, gracias!!
Muchas gracias por explicarlo !
Gracias por el vídeo! Debes revisar en el tiempo 1:42 min , la orientación y ubicación de los primers forward y reverse es errónea ya que la DNA polimerasa sintetiza la cadena en dirección 5´a 3´
Nice catch! Encontraste un error que nunca pensé que alguien más fuera a notar. Cometí ese fallo por mi necedad de querer hacer una animación cruzada, por lo que cambié las secuencias y las posiciones donde se acoplarían los primers. Gracias por compartir.
@@BrandonOrtizCasas Apenas iba a comentar lo mismo jajaja hice una tarea mal por eso XD. Excelente video bro.
PD: Ponle una notita o algo :'v
@@izcoatlmacias1638 Acabo de fijar el comentario!
Gracias por los videos.
Hermoso video, le entendí bien, gracias amor. 😘👌🏽
te amo, Gracias!!
Bien explicado
El arn o RNA polimerasa es una enzima que requiere un cebador de RNA?
excelente vídeo
Si tengo 3 pares de primers, en dos de estos con Tm de 54°C y en un par una es de 54°C y la otra de 56°C. Si todos ellos hibridan en la misma secuencia ¿cuál de los pares es recomendable usar para PCR?
Hola Araceli. Aquí dependen demasiadas cosas. Si nos guiamos únicamente por los Tm de tus primers, el par que tienen Tm´s distintas realmente no tienen una diferencia muy considerable de temperaturas, por lo que escoger una temperatura de alineamiento no debería ser un problema. Sin embargo, si los otros dos pares tienen la misma Tm, ya tienes las de ganar.
Si tuvieras que escoger, sería bueno que cheques también sus longitudes (que no tengas primers muy largos ni muy pequeños), el % de G/Cs y que no tengan regiones complementarias, obviamente.
Me podrías explicar más sobre el tema de la desnaturalización de la polimerasa? y de dónde sacaste esa información? Saludos!
Si eso x2 no encuentro esta parte en ningun lado solo en este video
Gracias por tu ayuda :)
Gracias a este vídeo y a un amigo se decir PCR en inglés, salu2
Una pregunta, el bromuro de etidio que no se intercala al ADN y quedan en exceso en el medio tambien liberarian fluorescencia cuando se le aplican los rayos UV?
Esta es una de las mejores preguntas que han hecho, e irónicamente, una de las más difíciles de contestar adecuadamente, ya que hay mucha química y óptica de por medio; y la literatura científica no ayuda mucho.
Pero dando los conceptos más simplificados: El BrEt como molécula rica en estructuras aromáticas, se pudiera considerar a simple vista como una molécula cuyos electrones son fáciles de excitar de un estado electrónico base a uno excitado (la pérdida de energía del estado excitado al base es lo que nosotros conocemos como fluorescencia). Sin embargo, resulta que existe un efecto de inhibición o de "quencing" por parte del medio (en este caso, agua) que impide que el bromuro disuelto pueda fluorecer.
Uno de los mecanismos más hablados es el de una transferencia de un protón del bromuro excitado al solvente, pero algunos autores no coinciden con eso. Por otra parte, la interacción que hay entre el bromuro y los ácidos nucléicos no permite la interacción con el solvente (algunos teorizan que existe un cambio en su configuración química, electrónica, o que simplemente se crea un espacio sumamente hidrofóbico que evita el proceso de quenching por parte del agua).
Puedes leer el paper de "Mechanism of ethidium bromide fluorescence enhancement on binding to nucleic acids" de Olmsted, pero es un paper viejo, y si no te gusta la química, no es nada amigable. Pero explican los diversos mecanismos propuestos por los cuales la molécula fluoresce únicamente al estar intercalada.
Espero la respuesta te sea útil.
@@BrandonOrtizCasas muchas gracias!!
excelente video, te puedo sugerir la realizacion de alguno ( divulgativo) sobre el CRISPR?
¡Gracias David! Mi canal tiene un vídeo sobre el sistema CRISPR cas, aunque como el resto, son un poco más académicos que divulgativos. Aún así, pienso subir unos 2 vídeos más al respecto. Uno explicando como se usa para editar genes, y otro con algunos expertos respondiendo preguntas.
@@BrandonOrtizCasas lo buscare, y a la espera de los videos!!
Uso este medio para hacer un llamado a todos los estudiantes y demás académicos para denunciar el uso incorrecto e interpretación errónea de la prueba PCR, haciendo constar de que se tiene una infección gripal (sin síntomas) por encontrar partes de ARN del Sars Cov 2.
los primers tienen los extremos 5 y 3 en mala orientacion no? si se elonga a partir del 3 no pueden estar colocados asi
Tienes toda la razón. Cometí un error al hacer la animación.
Podrían definir lo que es un DNTP? mencionado en el paso 4 "Extensión"
En la extensión, básicamente tienes que hacer una nueva hebra de DNA. Una hebra de DNA está compuesta de nucleotidos (AGCT). Estas moléculas o ladrillitos de construcción de la nueva hebra, están presentes en el medio de la reacción como DNTPs; que son básicamente nucleotidos con un par de grupos fosfato de más. Esta versión es la que le gusta a la polimerasa para construir una nueva hebra.
SOBRE LOS PRIMERS: Estos están causando mucha confusión (incluso para mi) por lo que de favor, lean este comentario primero.
La direccionalidad de los primers forward y reverse ESTÁ BIEN. Los forward tienen direccionalidad 5´ a 3´, se hibridan con la cadena molde, y tienen la misma secuencia que la cadena codificante. Los reverse hacen lo diametralmente opuesto
Sin embargo, lo que se presta a confusión es donde los coloqué, ya que invita a pensar que estos van a replicar en dirección 3´ a 5´ (osea, en dirección a los espacios en blanco). ESO NO PASA EN LA VIDA REAL. Las polimerasas replican en direccion 5´ a 3´, por lo que en la animación, este par de primers no replicarían absolutamente nada.
(Aquí pueden encontrar una linda imagen de como se ven: pediaa.com/what-is-the-difference-between-forward-and-reverse-primers/ )
Espero disfruten el vídeo, y no sean como yo al momento de diseñar primers :)
Hola Brandon, disculpa, ¿Cuál sería el producto final en el PCR si no se añade la mezcla de reacción a alguno de los primers?
Hola Minerva. Si te capté bien, si no metemos el master mix (polimerasa, magnesio, etc). Y solo metemos primers, realmente no tendremos amplificación alguna.
Cada uno de los componentes es vital para que esta suceda. Si falta un elemento, si los primers no son detectan nada o si no hay DNA, no habría amplificación.
@@BrandonOrtizCasas si me captaste jaja, muchas gracias!
@@BrandonOrtizCasas y hoy para el covid un virus ARN ,cual es el procedimiento que se esta usando?Es igual en todos los paises en los que se esta usando la PCR? Le pido paciencia, y comprendo no es facil, ante los ignorantes en el tema ,solo queremos entender para poder confiar.
@@iaraos779 Hola una vez más, Catalina. En diferentes países con diferentes políticas públicas, pueden variar algunos métodos de diagnósticos por diversas razones (en su mayoría, quizá económicas). Algunos países aparentemente han optado por el uso masivo de pruebas serológicas (y algunos de estos cambiando a pruebas moleculares), mientras que varios otros tienen a la PCR como el estándar.
Eso si, no necesariamente se utilizan los mismos kits, o incluso, no siempre se utilizan las mismas variantes de PCR.
Por ejemplo, hay un equipo de Abott llamado ID NOW que usa una variante interesante de la PCR que utiliza algo llamado amplificación isotérmica; y supuestamente entrega resultados en cuestión de minutos. Este equipo fue aprobado por la FDA, pero nunca fue aprobado en mi país (México). Desconozco de fondo las razones, pero todo se puede resumir a que es por cuestiones de regulación pública.
No te preocupes. Me han llegado hasta niños haciendo preguntas, y siempre trato de contestar. Es como una regla propia del canal, y para mi no es una molestía. Aunque a veces, las contesto un poco apurado.
@@BrandonOrtizCasas ja!hasta los niños preocupados. Espero que entre todos podamos encontrar la mejor manera de cuidarnos, que no necesariamente es la que nos indican. Satisfecha con el intercambio y la buena disposición.Saludos!
Con la corrección de los primers se refieren a que estan al revés?
Se unen en el inicio del 3' a 5' y en el final del 5' a 3'?
Voy a hacer un comentario por aparte, por que creo que esto ya causa demasiada confusión.
Si quisiera ver el perfil genético de bacterias en suelos, se usarían los mismos reactivos?
En esencia, los reactivos y sus concentraciones irán variando dependiendo de las necesidades del laboratorio y del tipo de regiones genéticas que se estén realizando.
En este caso, dependerá del tipo de bacterias que busques analizar. Puede que requieras algún coadyuvante, por ejemplo, si tomas una región rica en CGs (En el caso de las bacterias, generalmente se analiza regiones genómicas del 16s ribosomal). Si analizas varias bacterias a la vez de una muestra de suelo, muy posiblemente te serviría más una técnica de PCR multiplex (por dar un ejemplo, HRM) donde pudieras utilizar diferentes sondas para cada bacteria. Todo va a variar dependiendo de lo que requieras exactamente.
Buenísimos el video. Pregunta, Por que en una PCR es muy recomendado realizar una premix en lugar de preparar los tubos de reacción en forma independiente? Tiene que ver con la eficiencia y la rapidez
¿Podrías definirme que entiendes exactamente por "premix"? Hasta donde sé, le llaman así en algunos lugares al "master mix"; pero igual así le llama a algunas placas que tienen los reactivos liofilizados.
@@BrandonOrtizCasas Claro, seria como una master mix. Pero mi consulta pasa mas en saber el mecanismo. En clases me hicieron esa pregunta y estoy tratando de responderla. Seria genial si me podrias dar un diparador para saber a donde apunta o donde podria leer
¡Claro que sí! Solo que mi explicación sería un poco larga.
Esa razón (hasta donde puedo yo justificar) más que tener relación con la eficiencia, la rapidez, o un mecanismo químico específico; tiene que ver con el control de la calidad. Y esto es mucho más visible cuando uno trabaja en un laboratorio de diagnóstico molecular clínico.
Cuando uno hace PCR, debe cuidarse muchísimo de la contaminación. Y lo que uno menos quiere en un laboratorio así, es que los stocks de reactivos se vean contaminados, o el espacio donde se preparan las muestras esté contaminado con DNA de experimentos pasados. Esto causaría posibles falsos positivos nada deseados.
Si prepararas las muestras con los reactivos y el DNA al mismo tiempo, en el mismo espacio, corres el riesgo de que el DNA que metas ahí pueda contaminar tus stocks, tus pipetas, o de plano toda la zona. Por eso, cuando uno lee la teoría para diseñar un laboratorio para PCR, ve que estos DEBEN DIVIDIRSE en 3-5 zonas (Siendo una de las más importantes, la exclusiva para la preparación de master mixes). Esta zona debe estar lo más lejos de la zona donde dedicada a las amplificaciones (donde están los termocicladores), y lejos de centrífugas que puedan contaminar por aerosol, entre otras cosas.
Parece algo trivial, pero créeme que tiene muchísima importancia. Incluso te lo puedo decir por experiencia propia.
Debido a la gran cantidad de infraestructura necesaria, es raro ver este tipo de diseños bien delimitados en lugares como laboratorios de investigación. Si estás interesado en leer más al respecto, puedo recomendarte el manual "Molecular Diagnostic PCR Handbook" de Viljoen, Nel y Crowther. Tiene una sección muy buena sobre el diseño de un laboratorio y sus respectivas zonas.
@@BrandonOrtizCasas Claro, tiene sentido. Si ya tengo mi master mix es decir todos mis reactivos en un solo tubito me aseguro que mi mezcla de reactivo va a ser homogénea en todas mis condiciones de trabajo, adicinalmente evito el error por contaminación que es mas probable al preparar los tubos de reacción en forma independiente. No es para nada menor lo que decis. Muchas gracias.
pd po voy a tener presente para leer
¡Excelente! Me alegra el poder contribuir. ¡Un abrazo!
¿Qué colorantes son los que se utilizan para visualizar?
Hola! siento la tardanza. El más común es el bromuro de etidio para teñir DNA. Sin embargo, dado la farma de intercalante y agente carcinógeno del mismo, hay algunas alternativas como el GelRed. En PCR tiempo real, utilizamos mucho moléculas como el SYBR Green o de plano, sondas con fluoróforos incluidos.
arriba la profe sawako
como es el nombre del primer colorante que aplican a la hora de visualizar los resultados,porfavor minuto 5:10
Hola Juan. Xileno cianol.
Excelente video, Felicidades. Tengo dudas cuanto tiempo dura este proceso.
¡Hola! Realmente depende bastante aquí de a qué nos referimos con el proceso, pero trataré de ejemplificar. El proceso de los ciclos de temperatura generalmente dura entre hora y media y 3 horas a lo mucho. La obtención de los resultados, si fue PCR en tiempo real, prácticamente se habrán obtenido al instante que terminó de trabajar el equipo, mientras que revelar los resultados de una PCR de punto final tardará a lo mucho un par de horas más, en lo que uno corre el gel de agarosa.
Sin embargo, también podemos agregar el tiempo de recolección de muestra, la extracción de los ácidos nucléicos, la retrotranscripción (si hubo), la preparación de Master Mix, y la adición de las muestras a nuestros reactivos; lo cual obviamente añade más tiempo al proceso general. El análisis de los datos, si fue PCR en tiempo real, también es importante, y toma algo de tiempo.
Si juntamos todo esto y lo ponemos en un laboratorio de diagnóstico molecular, también se consideran otras cosas fuera de la química, como lo son la logística, la transferencia de info clínica y lo que se tarden en reportar los resultados. El conjunto de todo este tiempo se llama "turnaround time", y este varía de laboratorio en laboratorio. Algunos pueden tardarse una semana, y otros en menos de 24 horas ya tienen resultados.
Hay otros tipos de amplificación que no requieren temperatura (PCRs isotérmicas) y pueden darte resultados incluso en cuestión de minutos. Pero esas ya son tecnologías mucho más particulares.
@@BrandonOrtizCasas Excelente explicación, muchas gracias por la atenciones.
Alguien puede decirme si "PCR estándar" es lo mismo que "PCR en un solo paso" ? o se trata de dos técnicas distintas? A propósito excelente información, saludos
No sé muy bien a qué te refieres PCR estándar, pero hay PCR con un solo paso y con dos pasos. La diferencia es que en la de dos pasos se realiza la purificción del ADN tras la PCR.
¡Hola Alberto! Creo que ahí puede existir una confusión. Cuando mencionamos una "PCR estándar", lo más probable, es que hablemos de una PCR normal como la que se muestra en el vídeo. Cuando hablamos de una PCR de un solo paso (One-Step PCR) existen dos probabilidades: Quizá hace una mención a un equipo cerrado y automatizado donde solo pones una muestra y este te entregará resultados directamente; o (lo más probable) es que hace referencia a las RT-PCR de un solo paso (en la cual la retrotranscripción y amplificación se hacen en el mismo tubo), la cual es diferente a las reacciones de dos pasos (donde estos dos procesos se hacen por separado).
Si se amplifica un fragmento del ADN, del que salen muchas copias iguales de ese fragmento, por qué luego se visualizan lineas de diferente numero de pares de bases?
Depende. SI te refieres a lo que se ve en el primer carril, que tiene varias lineas distintas, ese es nuestro peso molecular. Osea, una mezcla de fragmentos con tamaños conocidos, para que nosotros sepamos el peso aproximado de nuestras bandas.
En otros experimentos, puede ser que se hizo algún tipo de procesamiento o digestión (e.g. un RFLP) hizo que el fragmento se rompiera en secuencias más pequeñas y de diferentes tamaños, por lo que verías más de una banda en una muestra.
@@BrandonOrtizCasas Podría ser que para obtener fragmentos de longitudes diferentes en la amplificación se utilizan varios cebadores distintos para obtener amplicones de distintos tamaños? Gracias por la respuesta, por cierto.
@@rafaelgs18 si los primers utilizados amplificaran secuencias de tamaños considerablemente diferentes, y si estos tienen Tm´s muy cercanas, podría ser. Sería como una PCR multiplex. Quizá un poco difícil de estandarizar en el lab, pero de que es posible, yo creo que si.
MUCHAS GRACIAS POR LA INFORMACIÓN MUY CLARA. sin embargo el sonido dejó mucho que desear. si quiere para la proxima puedo ayudarlo. :) saludos
Hola Sebastián! Gracias por tus buenas intenciones. Quiero creer que he mejorado el audio a lo largo del tiempo (puedes compararlo con los últimos vídeos) pero siempre hay área para mejora y siempre es bueno aprender del resto. ¡Saludos!
por que no se utilizan la helicasa, topoisomerasa, SSBs, girasa, ligasa, primasa?
Buena pregunta. No requerimos de la mayoría de esas enzimas, por que los ciclos de temperatura básicamente sustituyen esas funciones. A más de 90°C, el DNA se desnaturaliza sin problema, por lo que no requieres romper la doble hélice con la topoisomerasa, ni requieres abrir con la helicasa. Tampoco requieres los SSBs para mantenerla abierta. Para eso, simplemente cambias la temperatura y ya. La primasa no te sirve, por que estas generalmente identifican zonas promotoras. A nosotros nos interesa amplificar secuencias específicas del genoma, por lo que simplemente agregamos primers por separado, los cuales se alinean sin problemas al bajar la temperatura.
En unas pocas variantes de PCR, usamos helicasas cuando hacemos procesos isotérmicos, o usamos ligasas para algunas reacciones más complejas (e.g. MLPA)
Hola. Una pregunta. Que porcentaje de fiabilidad tiene un test PCR?.
Literal, eso dependerá de que tan bien hiciste la prueba. Como hay diferentes pruebas de PCR con diferentes características y que trabajan con diferentes analitos y matrices, los parámetros pueden variar entre empresas. Una prueba IVD (osea, para diagnóstico aprobada por la FDA) puede tener una sensibilidad y especificidad, por lo general, entre un 94-95% hasta un 99.9%. Si buscas diferentes kits, verás que te encontrarás con diferentes valores. Pero la gran mayoría >90%.
@@BrandonOrtizCasas. Aprovecho tu amabilidad. Si pongamos que quiero hacer un test PCR para saber si tengo, por ejemplo VIH, como puedo saber que es ese virus y no otro del que he hecho el análisis?.
@@ejcf81 Justamente lo que tendrías que obtener es la ESPECIFICIDAD de la prueba.
Tendrías que diseñar un experimento donde detectas algún serotipo (o todos) de VIH en la muestra o matriz (e.g. sangre de pacientes positivos) contra algo que te preocupa que haga ruido y cause falsos positivos (digamos, pacientes con VPH).
Mides la cantidad de verdaderos negativos que obtuviste, la cantidad de falsos positivos que obtuviste, y de ahí con una simple relación matemática, calculas la especificidad.
@@BrandonOrtizCasas Y la especificidad sabes si se esta haciendo hoy..? Creo que nunca hubieras imaginado que dos años despues de publicar tu video ibas a tener tantas preguntas de gente no lega..agradezco nuevamente su paciencia.
@@iaraos779 Hola nuevamente, Catalina. Creo que no entiendo muy bien tu pregunta. ¿A qué te refieres con que si se está haciendo hoy la especificidad? Si te refieres a si los kits comerciales están entregando resultados sobre su especificidad, así es. De hecho, yo no compraría ningún kit de esta naturaleza, si no tuvieran esa valores analíticos determinados como la especificidad. Y bueno, uno siempre en su laboratorio puede probar los reactivos y corroborar, pero no suele haber tanta desconfianza, especialmente si vienen de empresas que son reconocidas.
Tal vez no esperé tantas preguntas, siempre es una obligación moral el responderlas lo mejor que puedo.
Puedes explicar rt pcr por favor desde el fundamento
Claro, aunque la idea como tal es relativamente sencilla. Terminaré un video sobre Western Blot y proseguiré con uno de RT-PCR
Hola! Sabes de proveedores de insumos y maquinas de laboratorio, estoy haciendo un estudio financiero para una tesis, cualquier información te lo agradeceré mucho. Saludos.
Hola Gabriela. Específicamente sobre insumos, creo que lo más sencillo y práctico es que utilices la página de Sigma Aldrich (ahora Millipore Sigma). Prácticamente proveen de todo tipo de insumos, marcas y con todo tipo de cantidades, y es de las pocas proveedoras que te muestran los precios de sus productos (incluso convertidos ya a tu divisa nacional) sin necesidad de pedir una cotización (a menos que requieras "bulk orders").
Sobre equipos, mi recomendación es la página de Thermo Fisher. Claro que hay proveedores más pequeños, pero tendríamos que ver cuales están en tu país.
@@BrandonOrtizCasas muchas gracias
ADN / DNA
¿Cuál de las dos siglas consideran más apropiada para referirse al ácido desoxirribonucleico? ¿Cuál es la más frecuente en textos escritos en español?
La más apropiada es ADN, sigla asentada en español, incluso en textos científicos, y por tanto preferible a la inglesa DNA. Lo mismo se puede decir de ARN, preferible a RNA.
Pdta. Este es un apunte para mí
La mayoría de científicos desaconsejan utilizar los términos ADN y ARN en textos estrictamente científicos. Como utilizamos una enorme cantidad de anglicismos, sería completamente impráctico traducirlos con todo y sus siglas y acrónimos.
Este vídeo es el claro ejemplo. A la "Reacción en Cadena de la Polimerasa" se le conoce como "PCR" por sus siglas en inglés. Prácticamente nadie (ni siquiera en habla hispana) la referencia como "RCP". Ni en textos científicos, como tampoco en la vida cotidiana.
Comparar los pasos de la PCR con lo que ocurre en la célula. Alguien me ayuda??
¡Hola! Me agarras con tiempo. Con excepción de utilizar una polimerasa, el proceso de replicación en PCR es demasiado diferente al proceso de replicación celular.
@@BrandonOrtizCasas Hola, hay que comparar pasos de cada proceso, si me podrias ayudar te agradeceria!
5:30
Leyendo puro comentarios aprendo más que en mis clases xdxdxd.
Buenas, quería saber por qué es tan sensible esta técnica, gracias
Hola! La PCR (si está bien estandarizada) presenta muy buena sensibilidad y límite de detección debido a su naturaleza de crecimiento pseudoexponencial.
Como podemos diferenciar y cuantificar la amplificación hasta de hebras individuales (en algunos casos), esta técnica se presenta naturalmente como una con buena sensibilidad.
Mira esto ruclips.net/video/dVVm1FAiRgI/видео.html por lo visto nos han metido en grande. A la final son personas.que están en el poder y son como todos
Nadie ha mentido en lo absoluto. Y el mismo vídeo con Kary no lo desmiente. Nunca hemos dicho que la PCR como tal detecta si tienes COVID 19 (la enfermedad), sino SARS-CoV-2 (el virus). Tal es el caso de los famosos asintomáticos. Lo importante es saber que uno tiene o no el virus, por que aún sin síntomas o síntomas muy leves, esa persona aún puede representar un vector de infección. Además de que esa información tiene valor epidemiológico.
La PCR es una herramienta que se utiliza para apoyar a la clínica, y ha sido bastante bien recibida. Pero ningún laboratorio como tal solo puede decirte (o no debería) que tienes como tal COVID 19, sin la opinión de un médico primero. Y ESO SE HA REPETIDO YA BASTANTES VECES.
Por favor, déjense de tonterías.
JAJAJAJAJAJAJAJA no digas tonterías
La parte que no entendí es cómo la taq sabe hasta dónde copiar el adn?
¿Te refieres específicamente en como hace para lograr amplicones de un tamaño determinado? ¿O por qué las polimerasas se paran en general al momento de añadir nucleotidos?
@@BrandonOrtizCasas la primera
@@ignaciomartinez5866 Lamentablemente en este vídeo no es muy visual en ese aspecto, pero el tamaño del amplicón tú lo decides al momento de diseñar tus primers (para lo cual aún no tengo vídeo), ya que decides la distancia que hay entre las regiones de unión del primer forward y el reverse.
Pero puedes tratar de darte una idea en el minuto 4:23, donde los amplicones generados del ADN genómico sirven después como templates para el otro juego de primers. Como las regiones están predeterminadas, al final te quedarán casi puros amplicones de un tamaño particular.
Sirve para detectar el Covid 19, sabiendo q es artificial ?
¿A qué te refieres con artificial?
@@BrandonOrtizCasas se refiere a que el virus es artificial
El virus no es artificial, y la PCR detecta las secuencias que tu quieras diseñando las sondas especificas para ello
@@BrandonOrtizCasas ...Me refiero a que no es natural, no existe tal combinacion en la naturaleza tal y como el nobel descubridor del virus del sida lo indico a un noticiero europeo.
ruclips.net/video/Pz_PKTfYYBg/видео.html
@@nixmadon2283 Eres la gota que derramó el vaso. Tendré que hacer un vídeo al respecto.
Primers= sectores de la cadena
los primers no son fragmentos de ARN?
En el caso de la PCR, a menos que usemos un protocolo que requiera hibridación DNA-RNA o alguna variante más extravagante, casi nunca (o simplemente nunca) encontrarás primers hechos con RNA, ya que utilizarlos sería sumamente impráctico por su baja estabilidad.
Quizá la confusión yace en que la replicación de ADN utiliza una primasa, la cual sintetiza fragmentos de RNA. Sin embargo, la PCR es un procedimiento creado por el hombre, el cual que difiere de la replicación en varios aspectos.
@@BrandonOrtizCasasMuchas gracias por la respuesta!
4:11 se escucha un eco eso eso
eso eso...
k locazo,me perdi ,algo no esta bien en tu explicacion de arn(RNA)
Desconozco que sea, por que no recuerdo explicar algo sobre RNA en este vídeo.
@@BrandonOrtizCasas tal vez se refiera al Primer. Porque mencionas Primers de DNA, cuando los Primers que colocan las RNA Primasas en la replicación del DNA y a partir de los cuáles trabajan las DNA Polimerasas, son de RNA ; por el grupo oxhidrilo libre a partir del cuál se pueden enlazar nucleótidos. Pero como mencionaste en comentarios posteriores, es un proceso muy diferente al que ocurre en una célula per se. Excelente video, muchas gracias. :)
O quién sabe a qué se refería él JAJAJ.
PTM no entiendo nada
Es posible un falso positivo en esta prueba?? Por ejemplo en covid
Hola Eri. Es posible tener un falso positivo, pero por lo general, si está bien montada y hecha, es muy poco probable tenerlo.
Todo depende de los reactivos, y los controles (tales como los controles negativos de amplificación, o los controles internos de especificidad).
En contraste con otras técnicas (como las ELISA) tiene para estas aplicaciones, por lo general, mejores valores analíticos.
@@BrandonOrtizCasas muchas gracias por tu respuesta!
@@BrandonOrtizCasas y por qué se ha usado PCR en lugar de Elisa, al menos en España. Los PCR pueden discriminar virus?
@@josanguer Por la naturaleza de ambas técnicas.
La PCR utiliza primers, que son aquellos oligos que le dan especificidad hacia algunas regiones genómicas. En este caso, puedes tomar regiones conservadas del virus para generar tus primers, los cuales si están bien hechos, tendrán una especificidad bastante buena. Sumado a ello, la naturaleza de la PCR es la de amplificar secuencias de ADN. Aunque tengas muy poco material genético viral, es posible que lo detectes, ya que en unos cuantos ciclos, esta cantidad será apreciable. Es por ello que es muy útil para detectar copias virales.
La ELISA utiliza, por su parte, anticuerpos. En primera instancia, hacer anticuerpos específicos contra algo es una lata, y es mucho más caro ahora que simplemente producir oligos de ADN. Estos últimos los diseñas con un anàlisis bioinformático, los mandas a sintetizar y listo (aunque claro, es un tanto más complejo si haces sondas fluoresecentes). La producción de anticuerpos por su parte, es un proceso largo y caro que va desde inmunizar animales para obtener clonas y producir tus hibridomas, hasta toda la parte de escalamiento y purificación (el famoso downstream).
Si no quieres utilizar anticuerpos específicos contra el virus, puedes tratar de detectar anticuerpos serológicos humanos (IgGs, por ejemplo). La gran mayoría de pruebas rápidas se basan en detectar este tipo de anticuerpos. Sin embargo, tienes la limitante de que solo puedes detectarlos cuando el cuerpo las produce, por lo que hay un gran periodo de tiempo donde tendrías falsos positivos (el famoso periodo ventana). Esa es una limitante que como tal no tiene la PCR.
Sumado a ello, las ELISAs son caras, y son generalmente utilizadas únicamente para algunos microorganismos y virus para los cuales están ya muy estandarizadas (e.g. VIH). Y aún así, una PCR por lo general suele hacer mejor trabajo.
@@BrandonOrtizCasas pero la prueba PCR puede distinguir el virus específico que tiene un paciente? Puede diferenciar una influenza de otros virus? Es válida para contar virus?
Me hice la prueba dos veces el mismo día y salió una negativa y otra positiva
¿Y no te has puesto a preguntar que quizá pudo haber fallado algo distinto a la química? Por que pudo fallar desde la toma de muestra, hasta en casos extremos, de la misma ineptitud del personal de un laboratorio. No estás demostrando nada, dude.
@@BrandonOrtizCasas si puede ser también
La plandemia es falsa. Las.pcr a veces fueron manipuladas. O el presidente de Tanzania solo miente y todo el mundo pero solamente la gente a cargo de las medidas de covid del manejo y todo tienen la.oura verdad y ya. Es mojón ruclips.net/video/ISINERMaF6k/видео.html
@@virginiaakharman1593 ¿Estas diciendo que una conspiración planteada por prácticamente todo el mundo acaba de ser destapada, y que miles de trabajos científicos y clínicos acaban de ser invalidados por.... un vídeo de 16 minutos? Vaya que eres un genio...
@@virginiaakharman1593 JAJAJAJA el presidente de Tanzania me recuerda el idiota de Mbeki que por hacerle caso a los negacionistas del HIV generó un genocidio sanitario en Sudáfrica.
Yo estaba buscando paro cardio respiratorio, 🙃
:/
Alejate bromuro de etidio, le tengo miedo todavía.
Todo mentira
Si realmente te interesa el tema, te recomiendo que empieces a informarte en como funciona la biología molecular y la bioquímica. Hay vídeos muy simples y bonitos que te enseñan las bases.
De esa manera, será mucho más fácil para ti ver las incoherencias que dicen la mayoría de conspiraciones, y serás muchísimo menos suceptible a que te engañen. El verdadero conocimiento, te da poder, estimado. Tienes mayor capacidad que simplemente repetir lo que un par de vídeos te pidieron que dijeras.
@@BrandonOrtizCasas contestame esto porfavor... ¿el pcr detecta el coronavirus?
@@djwushuqjsg Depende exactamente a qué te refieras con detectar.
Determinar la presencia de material genético de SARS-CoV-2, SI.
1- Tiene algún significado que primers, cebadores, etc. del test PCR recomendado por la OMS (www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6988269/) den 100% en "query cover" y "per identity" en el genoma humano buscando en BLAST (blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)?
2- Y que den 100% con otros coronavirus?
No sirven tus links XD
Que raro a mi la secuencia "GTGARATGGTCATGTGTGGCGG" me dio sólo el 68%, creo que alguien está mintiendo XD XD
@@marianocrosetti5889 Ya lo hice y el resultado con el genoma humano es 68%, y pues si vamos a cucharear los parámetros...pues hasta con meter la secuencia de la sopa de letras y me va a dar 100% de identidad y si eso pasa entonces tampoco la sopa de letras existe, o posiblemente esté hecha con personas XD XD . Eso no es muy loable ni ético. 🙄🙄😬😬
También, las secuencias no son exactamente las que están en la tabla, fijate que hay algunas letras que son como comodines, pueden variar.
No me acuerdo si los probé en el genoma, pero sí probé con los otros coronavirus y sí hay varias coincidencias. Tenés que ir al BLAST de virus