오늘도 좋은 강의 감사합니다. 질문이 있습니다. C18컬럼에서 Solvent peak보다 앞에 peak가 나오는 경우가 있는데 이런 경우는 왜 그러는 걸까요? 물론 해당 물질을 제가 분석하고자하는 물질과 분리하기 위해 버퍼의 pH를 낮춰 이온화하여 컬럼에 리텐션이 없도록 의도한것이긴 하지만, solvent peak보다 앞에 나온다는게 잘 이해가 되질 않네요...
solvent의 칼럼이동속도는 이동상과 동일하므로 solvent peak보다 앞서는 peak은 없습니다. 아마도 retention 이 작은 물질 peak의 retention time에 solvent peak이 겹치고 solvent peak이라고 생각한 것이 solvent 아닌 다른 원인일 것입니다. 그리고 어떤 경우의 원인을 따지는 질문을 이런 식으로 대충하면 제대로 답을 못합니다. 자세한 조건과 상황을 알려 줘야 정확한 답이 가능합니다.
@@Dongheon_Cho 답이 늦었네요. 댓글 중에 링크가 있으면 게시 전 검토를 하도록 설정을 했다가(야동 사이트 링크가 걸린 댓글이 가끔 달립니다. 들어가지지도 않아서 더 짜증난다는...) 검토 중인 댓글을 지금 봤습니다. 링크는 access 권한이 없다고 나오네요. 크로마토그램을 못 봐도 이동상 및 샘플을 볼 때 methanol peak 전에 나오는 것은 아마도 evogliptin의 염인 tartrate 같습니다. 0.1% formic acid의 pH는 2.68이고(이럴 줄 알고 이동상 pH 계산하는 방법 동영상을 올렸지요...) tartrate의 pKa는 2.98, 4.34로 약 50%가 negative charge를 띠어 methanol보다 더 polar한 특수한 상황이 된 것 같습니다. 실험실에 tartrate salt나 acid가 있으면 소량 용해하여 injection 했을 때 처음 나오는 peak과 retention time이 동일하면 확인 가능하겠죠. 여유있으실 때 한 번 시도해 보시고 제게도 알려주세요. 감사합니다.
@@explanationfreak9535 solvent peak앞에 나오는 peak는 말씀하신대로 tartrate peak이 맞았습니다. Sample peak이라 생각했던 제생각이 틀렸습니다. 사실 이 분석법은 그 유명한 NDMA의 검출위한 분석법이었는데요, LC-MS인데도 불구하고 m/z값만 확인하면 쉽게 해결될 일을 저의 잘못된 판단과 귀차니즘으로 인해 시간만 날려버리고 욕을 잔뜩 먹어서 배가 부르네요...ㅜㅜ NDMA는 검체 peak와 완전히 같은 위치에 나왔었고 이로인해 NDMA의 이온화가 제대로 되지 않았던게 확인되어 분석법을 뜯어고치다가 결국엔 GC-MS로 해결했습니다... 선생님 강의를 들으면서 제가 몰랐거나 제대로 알지 못했던 부분이 많다는 점에 쪽팔리면서도 반성을 많이 하게 됩니다. (앞으로 얼마나 더 쪽팔릴까 걱정이... 나름 회사내 분석 원탑이라고 생각하는데...ㅜㅜ)
@@mantalcare leak 현상은 주로 칼럼 앞단 연결부위에서 생깁니다. leak이 생길 때 압력이 그리 높지 않다면 fitting bolt를 꽉 잠그시면 leak이 안 생깁니다. 힘이 없어서 꽉 잠그기 힘들면 휴지같은 것으로 감고 돌리면 됩니다. 압력이 높게 걸리면 칼럼 내부에 외인성 불용성 미립자가 많이 끼어 있다던가 칼럼 입자가 깨져서 압력을 높일 수도 있습니다.
![[분석화학] HPLC Introduction - 고성능액체크로마토그래피의 이해](/img/1.gif)
강의가 너무 좋아 구독합니다
안녕하세요!
강의가 안나오는 것들은 유료인걸까요??
같은 바이알 6회분석했는데 3번째 찍힌 데이터에서만 void volume이 크게 나왔는데 어떤이유때문에 그럴 수 있을까요??
감사합니다~
오늘도 좋은 강의 감사합니다.
질문이 있습니다.
C18컬럼에서 Solvent peak보다 앞에 peak가 나오는 경우가 있는데 이런 경우는 왜 그러는 걸까요?
물론 해당 물질을 제가 분석하고자하는 물질과 분리하기 위해 버퍼의 pH를 낮춰 이온화하여 컬럼에 리텐션이 없도록 의도한것이긴 하지만,
solvent peak보다 앞에 나온다는게 잘 이해가 되질 않네요...
solvent의 칼럼이동속도는 이동상과 동일하므로 solvent peak보다 앞서는 peak은 없습니다. 아마도 retention 이 작은 물질 peak의 retention time에 solvent peak이 겹치고 solvent peak이라고 생각한 것이 solvent 아닌 다른 원인일 것입니다.
그리고 어떤 경우의 원인을 따지는 질문을 이런 식으로 대충하면 제대로 답을 못합니다. 자세한 조건과 상황을 알려 줘야 정확한 답이 가능합니다.
@@explanationfreak9535
안녕하세요? 어제 집에서 질문드리느라 문제점에 대해 자세하게 설명을 못드렸던점 사과드립니다. 죄송합니다.
drive.google.com/file/d/14gF8h8ZYzaAZUa0tzJeUsktL6dST3Pst/view?usp=drivesdk
사진상에서 위쪽이 blank, 아래쪽이 sample의 크로마토그램인데, 아래쪽에 보시면 solvent peak앞쪽에 sample peak가 뜨는게 보입니다...
저도 선생님과 같은 생각인데 이런 현상이 보여서 질문 드립니다.
이동상은 0.1% formic acid in water, 0.1% formic acid in MeOH이고, 초기 비율은 90:10이며, 희석액은 100% MeOH입니다.
샘플은 evogliptin tartrate란 약이고,
사용 LC는 agilent 1260입니다.
감사합니다.
@@Dongheon_Cho 답이 늦었네요. 댓글 중에 링크가 있으면 게시 전 검토를 하도록 설정을 했다가(야동 사이트 링크가 걸린 댓글이 가끔 달립니다. 들어가지지도 않아서 더 짜증난다는...) 검토 중인 댓글을 지금 봤습니다. 링크는 access 권한이 없다고 나오네요.
크로마토그램을 못 봐도 이동상 및 샘플을 볼 때 methanol peak 전에 나오는 것은 아마도 evogliptin의 염인 tartrate 같습니다. 0.1% formic acid의 pH는 2.68이고(이럴 줄 알고 이동상 pH 계산하는 방법 동영상을 올렸지요...) tartrate의 pKa는 2.98, 4.34로 약 50%가 negative charge를 띠어 methanol보다 더 polar한 특수한 상황이 된 것 같습니다.
실험실에 tartrate salt나 acid가 있으면 소량 용해하여 injection 했을 때 처음 나오는 peak과 retention time이 동일하면 확인 가능하겠죠. 여유있으실 때 한 번 시도해 보시고 제게도 알려주세요. 감사합니다.
@@explanationfreak9535
설명 너무 너무 너무 감사합니다.
오늘도 즐거운 하루 되세요~
코로나도 조심하시구여~^^
@@explanationfreak9535
solvent peak앞에 나오는 peak는 말씀하신대로 tartrate peak이 맞았습니다.
Sample peak이라 생각했던 제생각이 틀렸습니다.
사실 이 분석법은 그 유명한 NDMA의 검출위한 분석법이었는데요, LC-MS인데도 불구하고 m/z값만 확인하면 쉽게 해결될 일을 저의 잘못된 판단과 귀차니즘으로 인해 시간만 날려버리고 욕을 잔뜩 먹어서 배가 부르네요...ㅜㅜ
NDMA는 검체 peak와 완전히 같은 위치에 나왔었고 이로인해 NDMA의 이온화가 제대로 되지 않았던게 확인되어 분석법을 뜯어고치다가 결국엔 GC-MS로 해결했습니다...
선생님 강의를 들으면서
제가 몰랐거나 제대로 알지 못했던 부분이 많다는 점에 쪽팔리면서도 반성을 많이 하게 됩니다.
(앞으로 얼마나 더 쪽팔릴까 걱정이... 나름 회사내 분석 원탑이라고 생각하는데...ㅜㅜ)
Post time울 두는게 꼭필요한지. ? 그리고 post time의 gradiet는 어떻게 정해지는지도 설명해주세요.
꼭 필요한지 아닌지는 상황에 따라 다르겠죠.
RID not ready가 40분째 똑같은데
RID기기에 문제가 생긴걸까요?
leak은 없습니다!
10%메탄올로 이동상 흐르게 한 뒤에
50%메탄올로 워싱할때 컬럼에서 leak이 되는데 이런건 왜 그런건가요??ㅠㅠ
점도 증가에 따른 압력 증가 때문입니다.
ruclips.net/video/swEk0ogXMY8/видео.html
@@explanationfreak9535
50%메탄올로 계속 사용해도 기계에 문제가 되는건 아닌거죠??
아니면 다르게 해결할 방법이 있을까요?
참고로 카페인정량 분석 후 항상, 50%메탄올로 워싱하고 있습니다.
@@mantalcare leak 현상은 주로 칼럼 앞단 연결부위에서 생깁니다. leak이 생길 때 압력이 그리 높지 않다면 fitting bolt를 꽉 잠그시면 leak이 안 생깁니다. 힘이 없어서 꽉 잠그기 힘들면 휴지같은 것으로 감고 돌리면 됩니다.
압력이 높게 걸리면 칼럼 내부에 외인성 불용성 미립자가 많이 끼어 있다던가 칼럼 입자가 깨져서 압력을 높일 수도 있습니다.
in English plz!!
Sorry for the language barrier. I'll attach English subtitles sooner or later. Thank you for watching.