Приготовление питательных сред для микробиологии. Полный цикл, все этапы. Часть 2
HTML-код
- Опубликовано: 1 дек 2019
- Продолжение видео о приготовлении питательных сред. Подробная демонстрация всех этапов приготовления питательной среды в микробиологической лаборатории.
Первую часть видео смотрите здесь:
• Приготовление питатель...
Основные моменты второй части:
- стерилизация сред (автоклавирование)
- разливка сред по чашкам и пробиркам
- контроль качества питательных сред.
********
Друзья, если это видео было полезным, в чем-то помогло вам - поддержите наш канал!
money.yandex.ru/to/4100114280...
По этой ссылке вы можете легко сделать перевод на банковскую карту или кошелек Яндекс-Деньги, пожертвования пойдут на развитие канала. Спасибо за ваше участие!
***********
Интересуетесь микробиологией?
Читайте в соцсетсях "Блог микробиолога-практика Романа Овчинникова"!
Фейсбук: blogmicrobiologa
ВКонтакте: blogmicrobiologa
Наш веб-сайт по лабораторной диагностике инфекций:
"Бакпосев.Ру" - bakposev.ru
#микробиологияиинфекции #микробиология #microbiology
👍👍Спасибо Вам большое за информацию.
Всегда пожалуйста)
Очень полезный ролик. С нужными подробностями. Спасибо.
Спасибо)
Отличное видео. Спасибо вам. До простой мысли ставить чашки Петри с застывшим агаром в термостат для проверки стерильности я не додумался. Сразу высевал на свежезастывший агар и потом гадал откуда в чашке развелось столько зверья, то ли посевной материал грязный, то ли агар был недостаточно простерелизован, то ли в момент высева налетело незваных гостей.
Да, контроль стерильности сред, и контроль чистоты помещений - это основы основ микробиологии)
Роман, подскажите, как часто и нужно ли проверять качество пит сред качественным методом с применением тест-штаммов? Используем в основном сухие пит среды отечественного и зарубеж производства, которые варим и автоклавируем. Своей коллекции тест-штаммов в лаборатории не имеем.
Здравствуйте. В лаборатории должен проводиться внутренний контроль качества испытаний. На это есть соответствующие документы, которые это регламентируют. По идее лаборатория должна иметь необходимые тест-штаммы. Хотя зависит, какие именно исследования вы проводите, что у вас за лаборатория. Целесообразно проверять ростовые свойства каждой новой партии сред. Ведь среды мы закупаем не так уж часто. Если этого не делать, то результаты наших посевов могут быть недостоверные.
Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста, какими способами можно закрывать колбы и бутылки для автоклавирования? Вы используете силиконовые пробки, их нужно неплотно надевать?
Добрый день! Как правило я использую ватно-марлевые и прессованные бумажные пробки, они пропускают воздух. Также использую флаконы с завинчивающимися крышками. Туго не завинчиваю. Сверху обвязываю бумагой или фольгой.
Здравствуйте! Вы сказали, что нужно проверить чашки, с разлитым в них агаром, в течении 5 дней в термостате? Значит вся остальная партия чашек должна где то храниться и ждать результата проверки? И еще такой вопрос, если после разлива агара на крышке чп появляется конденсат в виде капелек воды, как с этим быть?
Здравствуйте. Остальные чашки в это время хранятся в холодильнике. Конденсат - это нормально. После разливки чашки оставьте в боксе на сутки, чтоб подсохли. В холодильнике Храните чашки вверх дном. Перед работой за сутки подержите в боксе при комнатной температуре. Конденсат будет минимальный.
Здравствуйте! Скажите пожалуйста подойдёт любая модель автоклава? И какой лучше использовать автоклав именно для стирилизации сред? Какая у вас модель?
В принципе подойдет любая модель автоклава для лабораторий. У нас автоматический автоклав Sanyo, уже долго, надежный и простой в использовании.
Подойдет любая большая кастрюля под давлением!:)
@@user-rg8vf3eg5v не видела кастрюль с изюыточным давлением больше 0,7 атм (это щадящий режим)
Роман, здравствуйте! Подскажите пожалуйста как работать с готовыми чашками Петри с агаром (уже стеиильными), которые хранятся в холодильнике. За сколько до эксперимента их нужно/можно достать из холодильника? Заранее спасибо
Здравствуйте. Достаньте чашки накануне вечером. За ночь они прогреются, и подсохнут. Могут постоять при комнатной Т 1-2 дня.
@@roman.s.ovchinnikov благодарю за ответ
скажите пожалуйста какой не буть в среду сабуро добавляются антибиотики
Да, в среду Сабуро добавляют хлорамфеникол для подавления бактерий.
Здравствуйте! Могли бы Вы показать санитарно-паразитологические исследования (например воды). Выявление гельминтов с помощью концентратора гидробиологического? Спасибо за Ваши видео!
Спасибо за вопрос, но паразитология - не моя специальность. Микробиология не занимается гельминтами.
@@roman.s.ovchinnikov спасибо, будем искать
@@roman.s.ovchinnikov спасибо, будем искать
@@roman.s.ovchinnikov в любом случае, спасибо Вам за канал и качественные видео!
@@user-lx9lb7qr3f Спасибо Вам за отзыв, это приятно)
Здравствуйте! Спасибо за видео. Поделитесь пожалуйста опытом - как боротся с конденсатной жидкостью на скошеном агаре? Просто отстаивать или после застывания сушить в термостате?
Подержать пробирки при комнатной Т. Если пробка ватно-марлевая - конденсат где-то за ночь высохнет. Можно в термостате, если там влажность не высокая.
@@roman.s.ovchinnikov та вот не сохнет его там образуется где то 1- 1.5 мл
@@x-ray2511 что-то очень много. Какая среда?
@@roman.s.ovchinnikov ГРМ-агар
Поверх ватное марлевых пробок, какую бумагу необходимо использовать, проверяющие требуют крафт бумагу, поэтому вопрос конкретно про бумагу. Заранее спасибо за ответ.
Я считаю для этих целей лучше использовать пергамент, предварительно смоченный. Лучше прилегает, не соскочит.
Добрый день.
Не расскажете про технологию плавления агаровых сред?
Здравствуйте. Плавление уже готовых, но застывших сред, имеете ввиду? Их плавят на водяной бане. Простейший вариант - в кастрюльке с водой на плите. Некоторые плавят в сухожаре, но не доводя до кипения.
Скажите а Кондестат на крышках есть? Или если у меня есть ээто страшна как избавится от него снимите видео пожалуйста
Конденсат - когда разливают горячую средую Дайте есть остыть до 55С, потом разливайте.
В большинстве автоклавов нет режима стерилизации 112гр 0.5атм например для сред с углеводами (среда клиглера оболенск сухая), возможно ли использование режима 120гр в любительских целях? Какие модели автоклавов используются в стерилизации сред, как настраиваются режимы, програмно или в ручную.
Моделей автоклавов большое количество. В некоторых режимы можно настроить вручную, в других уже предустановленные программы. Не советую пользоваться автоклавом на любительском уровне, это серьезное оборудование.
Можно обговаривать с производителем нужные режимы, но в бактериологии принято что давление и время выставляются независимо друг от друга и в любой комбинации.
Не тащите автоклав домой, если вы не прошли обучение по работе на нём и у вас нет под боком мастера, который может регулярно проверять безопасность этого монстра.
Любое неосторожное движение и вы калека.
@@zaibusinka Автоклав домой и вообще домашняя лаборатория - это чревато. Но та же скороварка - это тоже автоклав по сути)
@@roman.s.ovchinnikov у скороварки всего одно соединение - крышка с кастрюлей и максимальное давление, помнится 0,5 атм (дальше клапан стравливает), а в автоклаве предохранительный клапан на 3 или 3,5 атм выставлен, одних только вентелей как минимум три штуки должно быть - случайно задел или просто какое соединение труб не выдержало - привет ожоговое.
@@zaibusinka Разумеется, автоклав требует более осторожного обращения, чем скороварка. К счастью в современных автоматических автоклавах всяких вентилей снаружи практически нет.
Сухожарым шкафом может быть духовка(газовой плиты), или микроволновка?
Чтобы расплавить среду? Можете попробовать эти способы на ваше усмотрение. Можно расплавлять на водяной бане.
@@roman.s.ovchinnikov не расплавить а продизенфицировать. Т.е., грубо говоря, литр приготовленной жидкой среды поместить в духовку на какое то время. Теоретически, из-за высокой температуры там погибнут оставшиеся бактерии.
@@Minivan4444 даже если в вашей духовке будет 500 градусов, жидкая среда в ней все равно не нагреется выше 100°С, при этом будет активно кипеть, пениться и очень быстро выкипит полностью. А дальше уже начнет прожариваться сухой остаток. Возьмите лучше бытовую скороварку или мультиварку, они набирают нужное давление и жидкость в них нагревается до 120°С без кипения.
@@fandorenko а я столько гадал зачем нужно давление?
@@fandorenko 120 градусов набирается только при давлении 1,08. А в скороварках не более 0,5-0,7 к тому же без манометра и температурного датчика. Но можно ориентироваться на конструкцию. По справочнику теплотехников при давлении 0,5 - температура 112 градусов, при 0,75 - 117 градусов. Получается в диапазоне между 112 и 117 градусов. Конечно не 120, но близко. При температуре выше 105 градусов большинство спор начинают гибнуть, может увеличиться только время стерилизации на 15-20%.
а приготовление жидких сред чем нибудь принципиально отличается?
По сути нет. В жидкие можно добавить агар, и получить плотные.
Здравствуйте, подскажите пожалуйста, как работать с СОЖ. Как делать посев на питательные среды? Подложки
Слизистая оболочка желудука? Нетипичный материал. В какой форме - на тампоне? Тогда обычный посев штрихом на набор сред.
Смазочно-охлаждающая жидкость ( водосмешиваемые эмульсии). на готовые подложки петрифильмы. нет методик. как работать ?
Где и сколько хранится партия среды в чашка Петри, пока проходит тест на стерильность? Какой документ это регламентирует?
Коллега, что касается различных нормативных документов, я думаю Гугл ответит ничуть не хуже, чем я, рекомендую сначала обращаться к нему. Если использование поисковиков по каким-либо причинам невозможно, то воспользуйтесь этой ссылкой - docs.cntd.ru/document/1200067870
@@roman.s.ovchinnikov Спасибо! Нашла этот документ.
@@roman.s.ovchinnikov Ждём новые видео. Интересует микробиологических анализ кормового зерна.
@@user-zq2xk1fb8r Да, интересная тема, особенно анализ зерна на грибы. Но сейчас зерном не занимаемся. Если закажете и оплатите такое исследование - тогда можем и видео снять.
Когда объясняете то некоторые слова не слышны от шума передвижений посуды на столе как называется штатив напишите пожалуйста
Не очень понял, о каком штативе идет речь? Вроде в видео не используется штатив..
Подскажите пожалуйста, неужели стерилизация возможна только в автоклаве?
Она возможна также в сухожаровом шкафу. Там обычно стерилизуют не среды, а посуду. А еще СВЧ тоже убивает микробов, но СВЧ-печи используют для стерилизации отработанных культур (специальные лабораторные СВЧ-печи)
@@roman.s.ovchinnikov в домашних условиях микробиологи без дипломов используют скороварки и мультиварки. Температура 120-130 градусов - ничем не хуже автоклава. Только объем небольшой, но есть скороварки и достаточно объемные, на 6-8 литров.
@@fandorenko Да, в домашних условиях для стерилизации некоторые используют скороварки, принцип тот же что и автоклав. Этот метод стерилизации описывал в своих книгах P. Stamets, популяризатор грибоводства.
Думаю нет! Кастрюля под давлением из нержаВейки тоже подойдет! "...Я ТАКДУМАЮ...!?
а пластиковые чашки петри одноразовые?
Да, конечно. Лабораторный пластик в основном одноразовый.
ну а скороварка это по сути тот же автоклав, просто маленьких размеров? она же тоже варит под давлением. её можно использовать?
В принципе вы правы. Наверно, можно использовать, но я бы не советовал)
Дело в том, что надо точно знать какое давление в скороварке. В автоклаве выставляется определенное давление, исходя от компонентов питательных сред, и которое поддерживается все время стерилизации.
Сильно сомневаюсь что моя скороварка делает рис при 2 атмосферах, в кулинарии это впринципе не надо
@@user-wi7fo6to8n на каждой скороварке установлен клапан. На нем написано максимальное давление, при котором он начинает сброс. Между температурой и давлением прямая связь. По мере того как растет давление, увеличивается и температура в скороварке. Давлению в 0,7 бар соответствует жар в 115-120 °C. Есть скороварки, рассчитанные на 1 бар.
Для глюкозо/лактозопептонной среды и прочих нежных сред.
Да, можно. Если ваша скороварка может держать необходимый температурный диапазон. Это легко проверить контрольными тестами на температуру и время.
А духовка, кстати, это сухожаровый шкаф для стерилизации (при тех же условиях, используйте тест-контроли)
А как приготовить МПА?
В МПА главный компонент - это пептон (в виде порошка). Кроме него нужны агар и вода. Это наиболее простая среда.
как приготовить кровяной агар? он вообще продаётся в виде порошка?
Продается сухая основа. В нее нужно добавлять специально подоготовленную кровь. Кровь такая продается в определенных лабораториях.
Можно купить дефибринированную кровь барана во флаконах.
@@Koala_plans это без фибриногена чтоле?
@@Koala_plans Можно, но мало где. Вы например где покупаете?
@@roman.s.ovchinnikov можно самому сделать если есть виварий с баранами. Интересно, а человеческая кровь подойдет?
А про индикатор для контроля стерилизации не сказали ни слова
Спасибо за ремарку, это важный момент. Действительно, упустил из вида, надо будет отметить это в следующих видео.
Это какая питательная среда, названия скажите
Это среда Сабуро. Посмотрите 1ю часть видео.
@@roman.s.ovchinnikov спасибо
А где контроль pH после стерилизации??И когда объем сред очень большой и вовремя нужно произвести посев!
Да, рН среды надо контролировать до и после и стерилизации. Насчет объема не понял вопроса
ПЕПТОН - ИЗ ЧЕГО ОН ДЕЛАЕТСЯ ИЛИ ИЗ КОГО ???
Пептон делается из мяса, обработанного ферментами. Или другими гидролизующими агентами.
А термоиндикпторы не положил
Индикаторы контроля стерилизации?
Спасибо за фильм! Пару замечаний.Музыка,как фон это лишнее.Длинное вступление
Спасибо за комментарий)
Все видео хорошее но проблемы с микрофоном вас очень плохо слышно.
Роман! Каждая домохазяйка у которой есть герметическая кастрюля можетработать с автоклавам! Не нужно важничать черезчур!
Может? Пусть работает, раз вы так считаете. Но я бы в такой лаборатории анализы не делал. А вы как знаете.
По-вашему любой водитель легковушки легко может водить грузовые авто без дополнительного обучения? Гибдд важничает, значит?
Добрый день! Если мой бульон Сабуро выпал в осадок и помутнел после пастеризации(60-80С 8-12часов), я его перегрел или передержал?
(Бульон в пластиковых флаконах, по этому не могу стерилизовать в автоклаве)
Добрый день. Не сталкивался с подобным явлением, хотя я никогда не пастеризовал среды. Их надо готовить в соответствии с инструкцией. Сама среда из готового порошка? или из чего?
Микробиология и инфекции. Канал Романа Овчинникова да, среда из купленного порошка.
От перегрева среды обычно темнеют.
В вашем, скорее всего, просто зародилась новая жизнь ) (помутнение питательных сред это признак роста микроорганизмов)