Видео

음~ 128mg을 물 10ml에 녹인 후 128㎍/ml로 희석을 하고 그 후로 2배씩 희석하는 것인데요 ㅎㅎ 다시 한 번 천천히 희석하는 부분을 보시면 이해가 되실꺼에요~^^

앗~ㅎㅎ 동영상을 잘 보시면 다 나오는데요^^; 동영상 참고하시고 조금 더 구체적으로 질문해 주시면 답변 달아드리겠습니다~

이런이런~~~뭐든 처음이 어렵죠 ㅎㅎ 고생했습니다. 원인을 찾아 한 번 더 하면 잘 하실 수 있을꺼에요~ 화이팅~!!

잘 이해가 안되네요. 10에 4승 희석해서 나온 콜로니가 578이면 5,780,000개 아닌가요? 무엇을 계산해달라는 건지 잘 모르겠습니다^^;

0.8%면 1ml당 8mg이 들어있는 샘이 되네요 8mg/ml 8mg은 800㎍/ml 이니 대략 8배 정도 희석하면 됩니다. 귀찮으면 그냥 10배 희석해서 써도 될 것 같습니다~^^

​@@TQSRE감사합니다! 그런데 페트리 접시에 도말하고 24시간 37도 돌렸을 때 대장균이 영상에서처럼 억제대가 자랄 정도로 자라지 않고 불투명한 점 몇 개만 보여서 판단을 하지 못했습니다ㅠ 영상에서처럼 자라려면 어떻게 해야 하나요??

@@user-lb9sp3wr5b 음~대장균이 잘못된 것 같은데요? 정상적인 대장균이면 자연스럽게 잘 나옵니다

ㅎㅎ 그럼요~~^^

알약을 빻아서 ㅁ액으로 만드려고 하는데 괜찮을까요 ?

@@Ga-yeonShin 네 괜찮습니다. 대신 농도를 2배 정도 진하게 만드셔야 합니다. 처방받은 알약들은 대부분 부형제가 같이 들어있는데 약의 종류마다 다르지만 대략 50% 이상 부형제가 들어갑니다.

음~~제 생각에는 너무 과하게만 달궈지지 않게 살짝 화염멸균을 할 필요는 있을 것 같네요. 금속판에 딱히 세균이 살 것 같지는 않지만 원래 묻어있던 곰팡이 포자나 세균이 있으면 실험 결과에 영향을 미칠 수 있으니까요~^^

@@TQSRE 화염멸균하는 물건들은 다 멸균했다가 몇초정도 식혀야하는 거죠…?? 그리고 알코올램프 안쓰고 멸균 할수있는 방법은 없나요?

@@채원-z1e 음~보통 실험실에서는 알코올 램프나 가스 버너를 사용하죠 사실 양초같은걸 사용해도 되겠지만 그으름 때문에 않좋을 것 같네요

@@TQSRE 정말 마지막으로 ㅠㅠ 금속판은 무거워서 뒤집어 배양하면 떨어질까요…?? 뒤집지않은채로 배양해야할까요?

@@채원-z1e ㅎㅎ뒤집어서 배양하는건 뚜껑에 물기가 생기지 않게 하려는 것이니깐 꼭 뒤집어서 배양할 필요는 없습니다~^^

음~~대장균이 다 배양되서 자란 걸 말씀하시는 거죠? ㅎㅎ 그럼 안됩니다~ 그렇게 대장균이 사멸할수는 있겠지만 대장균이 자라난 콜로니 자체가 없어지는 것은 아니니까요 눈에 보이지 않게 자라지 않은 상태에서 생장이 억제되어야 억제되지 않고 자란 다른 대장균들에 의해 억제대가 눈으로 보이는 것이지요~

위에 답글 달아드렸습니다

위에 답글 달아드렸습니다

@@손정호-v5y 8mm 두꺼운 것은 50~60ul 까지 가능합니다~^^

흠~~질문이 조금 잘못되었네요 ㅎㅎ 생강, 매실, 마늘로부터 천연항균물질을 어떻게 추출하는지 물어보시는 거지요? 천연항균물질의 추출은 방법이 워낙 많고 다양해 다 설명드리기 어렵습니다. 대표적으로 열수추출, 주정추출, 수증기 증류법 등이 있는데 인터넷에 한 번 찾아보시는 것이 더 빠를 것 같습니다~^^;

아~ 착즙도 일종의 추출 방법 입니다~^^

지름은 항생제 감수성을 나타낸다는 것이죠. 억제대가 나타나는 농도 이상으로 처리해야 세균이 죽는다는 것입니다. 내성을 더 쉽게 가지는지 알아보는 실험과는 거리가 있습니다.

변할 일이 없지만 혹시라도 변했다면 그건 화염멸균을 너무 오래해서 그래요 ^^;

@@user-uu5cq8rc9i 아~ㅎㅎ사진이 없어 확실하진 않지만 다른 균에 오염된 것 같습니다^^

@@손정호-v5y 아~ 정밀저울을 이용해 0.128g을 측정해 녹이고 2배씩 희석한 것 입니다. 정밀저울이 없다면 더 많은 양을 사용해서 10배, 2배씩 희석하면 됩니다~ 인큐베이터가 일정한 온도로 유지시켜주니 결과가 잘나오죠~ 인터넷에 저렴한 DIY 인큐베이터 같은 것도 있으니 활용해보세요~

@@TQSRE 감사합니다!!!

​​@@TQSRE10:25 에 나오는 7개 마이크로 튜브를 꽂는 노란색 기구 이름이 뭐고, 사용하신 마이크로 튜브 용량은 몇 ul를 쓰셨나요?

@@손정호-v5y 아~ 저건 렉이라고 부릅니다. 마이크로튜브를 꽂아 놓는 거죠. 마이크로튜브는 일반적으로 1.5ml 입니다.

@@TQSRE 감사합니다!!

락스 희석한 물에 담궜다 버리시면 됩니다~^^

에탄올 추출이요? 무슨 얘기인지 이해가 잘 안되네요^^;

락스를 희석한 물에 담궈 살균하여 처리하면 됩니다~^^

네 안녕하세요. 기본적으로 페이퍼 디스크와 거름종이는 같은 재질입니다. 동그란 모양으로 만들어 사용하셔도 되는데 멸균과 건조 후 사용하시는 것을 추천드립니다~^^

네 안녕하세요. 제 영상이 도움이 되었다니깐 너무너무 기분이 좋네요~~^^ 1. 찜기를 이용한다는 것은 무척이나 좋은 생각입니다. 증기가 배출되는 것을 한 곳으로 모으기만 한다면 더없이 좋은 실험기구가 될 것 같습니다~^^ 2. 당연히 활용해도 좋지요~ 제가 그린 것도 아닌데요~ 지금 보니 국립산림과학원에서 만든 자료 같은 데요 아마 구글에 “식물 정유 추출” 정도의 키워드로 검색하면 나올 것 같네요~^^

아~불 주변은 대류현상으로 인해 낙하균에 의한 오염 확률이 적어지기 때문입니다~^^

아~ 2배씩 희석하기 편해서 입니다~ 128-64-32-16-8-4-2-1 요렇게 희석하니까요. 근데 꼭 그렇게 안해도 됩니다~^^

네~ 안녕하세요 고생이 많으시네요~ 1. 콜로니를 분리해서 실험을 진행하는 것이 맞지요~^^ 일단 세균의 분리 방법은 따로따로 떨어진 독립된 콜로니를 얻는 것에서부터 시작합니다. 만약 면봉을 배지에 문질러 따로따로 떨어진 콜로니가 나오면 쉽게 해결되겠지만 그렇지 않으면 희석법을 사용하는 것이 비교적 간단하죠. 세균을 채취한 면봉 대가리 부분을 잘라 멸균된 식염수 10ml에 넣고 마구마구 흔들어 잘 섞어줍니다. 이것을 다시 10배씩 희석해서 각각을 도말합니다. 이 방법은 “생균수 측정법” 편을 보시면 도움이 될 것입니다~^^ 2. 음~~액체배지는 사용하는 목적이 좀 다른 것인데요~ 실험 방법을 어떻게 구상하느냐에 따라 액체배지가 사용되죠. 액체배지는 대부분 대량배양이나 증균 등의 목적으로 사용되긴 하는데 무슨 이유로 액체배지를 이용해야한다는 건지 잘 모르겠네요^^; 3. 약국에서 구하는 항생제가 물에 잘 녹는 성분일 경우에는 물에 녹여 사용하면 됩니다. 근데 대부분 조제한 약품의 항생제는 100%가 아니라 50%정도 되는 부형제가 섞여있습니다. 이것이 잘 안녹을 수도 있죠. 조제된 항생제에 대한 정보를 찾아보시면 아마도 부형제가 몇% 들어있고 항생제는 어떤 종류인지 정보가 나와 있을 꺼에요 그걸 참고해서 실험하시면 됩니다. 4. 압력밥솥에 물을 넣고 찜기 같은 걸 놓은 후 위에 올려놓고 알루미늄 호일로 감싼 면봉을 찌는 거죠~ 멸균기도 고온고압의 증기로 멸균하는 것이라 똑같은 원리입니다~ 그리고 잘 건조시켜 사용하면 됩니다.

빠른 답변 감사드립니다ㅠㅠ 생균수 측정법 영상을 보고 왔는데 이와 같이 콜로니를 배양한 다음에는 항생제 감수성 실험을 어떻게 진행해야 할까요ㅠㅠㅠ?? 그리고 꼭 LB배지에 배양해야 되는 건가요? 정보가 많이 없는 실험이라 궁금한 점이 많습니다🥹🥹 도움을 주셔서 정말 감사합니다.

@@ssseul 아~네 그렇게 콜로니가 생기면 모양과 색깔 등이 다른 콜로니들을 따로따로 새로운 배지에 스트리킹해서 보관합니다. 그리고 그것들을 다음 실험에 사용하는 것이죠. 보관된 세균을 대상으로 그람염색하고 동정한 후 액체배양해서 배지에 깔고 감수성 테스트를 합니다. 안해본 실험이라 설명만 가지고는 이해하기 어려울 수도 있겠어요 ㅜㅜ 독학은 매우 어려운 것이죠 ㅜㅜ

@@ssseul 아 그리고 LB배지가 아니어도 대상 세균이 잘 자라는 배지를 사용하시면 됩니다

@@TQSRE 정말정말 감사합니다. 진짜 마지막으로 질문 하나만 더 해도 될까요🥺🥺 생균수 측정법으로 콜로니가 생기면 그 콜로니를 어떤 방식으로 스트리킹을 하는지가 궁금합니다. 그냥 배지 위 콜로니를 스트리킹에 사용할 도구에 묻힌 다음에 진행하면 되는 건가요..? 배양된 콜로니는 액체상태가 아닐텐데 어떻게 미생물을 묻혀 스트리킹을 하는지 이해가 안 돼서 질문 드립니다ㅠㅠ

ㅎㅎ 관심가지고 봐주셔서 감사합니다~^^ 시중에서 파는 유산균 약제들로 실험하는 것은 상관 없습니다. 유산균의 박테리오신이나 젖산 등에 의해 세균의 생장이 억제되는 것을 많이들 실험하죠^^

@@TQSRE 그럼 반대로 유산균의 생장이 억제되는 것을 실험해도 되나요?

@@정소윤-b4k ㅎㅎ되지요~

왜 증류수에 담갔다가 하죠?

@@TQSRE 이전 용액이 묻었기 때문에 증류수로 헹구고 휴지로 닦는 식으로 페이퍼 디스크를 배지 위에 놓았어요

@@김종민-x9e 아~이런 알코올램프로 화염 멸균 하는 것이 가장 확실한 방법이긴 합니다. 휴지가 멸균된 것이 아니므로 다른 오염의 우려가 있죠~ 실험을 하다 보면 그리 쉽게 오염 되지 않기도 하지만 이게 또 오염이 될려면 아주 사소한 것으로도 쉽게 오염이 되서 실제 실험하는 사람들은 그냥 안전하게 클린벤치 등을 활용하긴 합니다~^^

딱히 상관은 없겠지만 보기에 않좋을 것 같습니다

@@TQSRE 넹

무슨 말씀인지 이해가 안됩니다 ㅜㅜ

@@TQSRE 페이퍼 디스크에 항생제 용액을 흡수시킬 때 피펫을 이용해 위에서 떨어뜨리지 않고 그냥 마이크로 튜브에 담가서 할 경우는 결과가 달라지나요?

항생제를 흡수시키고 건조 후 배지에 올려놓는 것은 메뉴얼에 적힌 방법으로 언제 어떻게 실험하더라도 같은 결과가 나오게 하려는 일종의 변인통제 입니다. 어떤 때에는 건조시키고 어떤 것은 덜말리고 어떤 것은 안말리고 실험하면 결과가 서로 다를 것이니까요. 제가 실험적으로 어떤건 말리고 어떤건 말리지 않은 상태로 실험한 적이 없어 어떻게 다르게 나올지 말씀드리기는 어렵네요 ^^; 실험중이시라면 모두 동일하게 건조시키던지 건조시키지 말던지 통일해서 실험한다면 딱히 상관은 없을 것 같습니다~^^

음~~동영상에서 보이는 것들 이겠죠?^^; 푸른곰팡이, 황색포도상구균, PDA 배지, 메스, 알코올램프 등등 ㅎㅎ 혹시 제가 놓친게 있으면 동영상을 보면서 잘 체크해 보시기 바랍니다~^^

@@TQSRE 감사합니당!!

헉~~~~영상을 다시 집중해서 보시기 바랍니다ㅜㅜ 글과 그림으로는 이해가 힘들 것 같아 생략된 과정 없이 모든 과정을 찍어 올렸기 때문에 영상을 천천히 다시 보시면 될 것 같습니다. 일반적으로 사기 힘든 E-test를 학생들이 따라할 수 있도록 재구성해본 것 입니다~

네 안녕하세요~ 세균을 추출한다는 것은 변기나 손에 있는 세균을 따로 분리해낸다는 것이죠? 이건 생균수 측정법을 따라 응용하는 것이 가장 일반적입니다. 손이나 변기에 세균이 한 가지 종류만 있는 것은 아니므로 여러 종류의 세균들을 따로따로 독립적인 콜로니 상태로 만들어야 육안으로 구분이 가능하거든요. 그렇게 생성된 각각의 콜로니들을 보면서 모양과 색깔 등으로 서로 다른 콜로니를 다른 배지에 스트리킹하여 보관합니다. 그리고 다음 실험에서 그 콜로니들을 사용하는 것이지요. 배지가 뿌옇게 되는 것은 세균들이 엄~청나게 많아 콜로니를 형성하지 않고 무리지어 자라는 상태인 것입니다. 투명한 부분이 생기는 것은 항균작용으로 그 부분에 세균이 증식하지 못하는 것이지요. 세균이 생성하는 콜로니의 색깔에 따라 다르게 나타나기도 합니다.

이 실험을 할 때 손이나 변기에 있는 세균을 각각 분리하지 않고 실험을 할 수도 있나요?

그리고 이 영상내에서는 뿌옇던 부분이 항생효과로 인해 선명해지는 것으로 항생효과를 볼 수 있었는데 변기나 손의 세균을 배지에 발랐을 때 뿌옇게 되는지 뿌옇게 되지 않는다면 아떤 방법으러 항균효과를 찾아야 하는지 궁금합니다.

@@이예준-q9p ㅎㅎ세균을 분리하지 않고 실험하는 것은 실험자 마음이죠~ 근데 그렇게 실험하면 실험의 목적이 불분명해지죠. 특정 세균에 대한 항균작용을 확인하는 것이 항생제 감수성 테스트의 주요 목적이니까요

@@이예준-q9p 음~~~영상을 잘못 보신 것 같은데요. 실험에 대한 이해도 많이 부족하시구요~ㅎㅎ 실험을 한 번 해보시면 알 수 있을꺼에요~ 뿌옇던 부분이 선명해지는 것이 아니라 원래 투명했던 부위에 뿌옇게 균이 자라는 거죠~^^ 생각한 대로 변기나 손의 세균을 배지에 발라 키워보면 제가 무슨 말을 하는지 알 수 있습니다~^^

ㅎㅎ당연히 가능합니다~ 그저 대표적인 그람양성균과 음성균을 제공하는 것 뿐입니다^^

ㅎㅎ무슨 말인지 모르겠는데요? 구체적으로 질문해 주세요~^^;

질문이 많네요 ㅎㅎㅎ 1. 무슨 말인지 잘 이해가 안가네요^^; 희석은 균의 농도가 너무 높거나 일정하게 맞출 때 하는 것이죠. 2배로 희석하고 싶으면 2배로 희석하고 싶으면 균 1ml에 식염수 1ml를 넣으면 되고 10배로 희석하고 싶으면 균1ml에 식염수 9ml를 넣으면 됩니다~ 100배 희석하고 싶으면 10배 희석과정을 한 번 더 하면 되구요~ 2. 뭐 가능하기도 하겠죠? 그런데 실험의 목적을 명확하게 해야 할 것으로 생각됩니다. 보통은 대장균에 대한 항생제 감수성 검사~~~요런 식의 실험 목적이 있는 것이죠. 박테리아액에 어떤 박테리아가 얼마나 들어있는지 알지 못하는 상황에서 그냥 하는 것은 의미가 없다고 봅니다. 사실 박테리아들이 그냥 잡곡 섞이듯 섞여있으면 참~ 좋을텐데 세균들도 경쟁이란 것을 해서 특정 종이 우점하는 일이 생기거든요. 단순히 이것저것 섞어서 모두에 대한 것을 보려 했는데 알고 보니 대부분 생장이 억제되고 유산균만 가득했다~~라면 실험하는 의미가 사라지는 것 아닐까요? 3. 보통 18시간 이상 배양 합니다. 4. 페이퍼디스크의 크기에 따라 달라요. 지름이 6mm인 디스크는 20㎕ 정도 들어가고 지름이 8mm인 디스크는 50㎕ 정도 들어갑니다. 디스크에 담을 수 있는 양 이상을 담을 수는 없구요 5. 아~~요부분은 좀 난해합니다. 균마다 좀 달라서 이건 자료를 좀 검색해 보시는 것이 좋을 것 같습니다~^^ 도움이 되었으면 좋겠네요~^^

@@TQSRE 답글 감사합니다!

상관 없습니다. 하지만 여러개를 하려면 좀 작아야 겠지요? 제가 실험에 사용한 것은 지름6mm입니다. 시중에서 파는 것은 6mm와 8mm 두 가지 이고 8mm는 두꺼운 것과 얇은 것으로 나눠집니다. 페이퍼디스크의 지름과 두께에 따라 들어가는 시료의 양이 달라집니다.~^^

아이고~안녕하세요~ 이거 참 어려운 질문입니다. 실험한 배지 상태를 직접 봐야 뭔가 답을 드릴 수 있을 것 같은데요 ㅜㅜ 일반적으로는 색이 잘 안나왔다 하면 해당 배지의 색을 변화시키지 않는 다른 세균이라는 것을 의미하죠. 말씀하신 배지는 장내미생물 중 대장균이나 살모렐라와 같은 특정 세균을 판별할 때 주로 사용하는 배지입니다. 그러므로 발색이 않된 것은 해당 균이 없다거나 아니라는 것이므로 일반적인 실험목적(식품회사와 같은 곳)에서는 다행이라고 생각하며 판매에 이상이 없다며 안심하겠지요~^^ 근데 질문하신 분의 생각에는 loop를 화염멸균 후 잘 식히지 않았다거나 streaking을 잘 못했다는 것을 의심하고 있는 거죠? 이런 경우에는 세균이 배양되지 않고 콜로니 형성도 거의 이루어지지 않아 말 그대로 실험이 꽝~인 것입니다. 하지만 세균이 자라있고 발색만 되지 않은 것이라면 해당배지에서 색을 나타내는 목표균이 아니라는 것입니다. 정확히 목표세균인 대장균이나 살모렐라를 사용했다면 오염 등으로 인해 접종하기 전 세균이 잘못된 것을 의심할 수 있고, 다른 하나는 배지가 잘못 만들어진 것을 의심할 수 있습니다. 하지만 대부분 배지들은 해당배지의 Mix를 이용해 만들거나 구입하여 사용하므로 배지가 잘못되었을 가능성은 매우 낮다고 생각됩니다. 아무튼 정리하면 ① 배지에 세균이 자라있나 확인 → ② 안자랐으면 꽝(streaking 문제), ③ 자라있는데 색만 안나왔으면 목표세균이 아님 으로 정리할 수 있겠네요~^^

네 안녕하세요~ 쉽게 말씀드리면 NC(Negative Control)은 무조건 안나와야 하는 대조군이고 PC(Positive Control)은 무조건 나와야 하는 대조군입니다. 일반적으로 대조군(Control)은 실험이 제대로 잘 진행되었는지 알아보는 매우 중요한 요소이지만 실험군의 변인에 집중하다보면 자주 놓치는 것이기도 합니다. 실험이 잘 진행되어 예상된 결과대로 나오면 굳이 생각할 필요가 없어 신경을 잘 못쓰지만 실험결과의 객관성을 높여주는 매우 중요한 것이 control이죠. 예를 들면 천연항균제 3개를 실험했는데 모두 다 항균효과가 잘 나왔는데 NT도 항균효과가 있는 것으로 나왔다면 실험이 잘못된 것이겠죠? 또 전부 다 안나왔는데 PC도 잘 안나왔다면 이것도 무언가 잘못된 것입니다. 뿐만 아니라 실험결과가 이상하면 문제를 찾을 수도 있는 것이죠. 시료가 잘못된 것인지 균주가 이상한 것인지 같은 것입니다. 쉽게 설명드리려고 했는데 이해가 되셨으려나 모르겠네요~ 또 궁금한 사항이 있으면 언제든지 말씀해 주세요~^^

소장님 만약 카나마이신이 고체 형태의 알약으로 되어있을때 액체 상태로 만드는 방법이 있나요??

@@김보라돌이-k2b ㅎㅎㅎ네 간단합니다 물에 녹이면 됩니다~^^ 알약은 일반적으로 부형제와 코팅제가 같이 혼합되어있기 때문에 잘 안녹아 보이는 경우도 있긴 합니다 하지만 카나마이신은 물에 잘 녹습니다~

감사합니다! 혹시 농도는 어느정도가 적당할까요??

@@김보라돌이-k2b 음~ 일반적으로 실험실에서 항생제를 10~100㎍/ml 농도로 만들어 사용하는데 부형제가 들어있는 양을 보고 만드시면 됩니다. 예를 들어 200mg알약에 카나마이신이 100mg 들어있다하면 전체무게의 50%가 부형제이니 20~200㎍/ml 정도 농도면 되지 않을까요?~^^

안녕하세요~ 과일껍질의 종류에 따라 다르겠지만 자몽이나 귤껍질 같은 것으로 실험해봤을 때에는 아주 잘 나왔습니다~^^

​​@@TQSRE자몽이나 귤껍질로 하셨을때도 똑같이 오일이랑 워터 나오고 향도 실제 과일껍질향이랑 똑같으셨나용?

@@츄워 오일과 워터는 당연하고 향은 훨씬 진하죠~^^

​@@TQSRE혹시 제품 주문받으실생각 없으신가요? 꼭 오일 추출하고싶은 과일이 있는데 오일이 잘 나올지도 모르는상황에서 기계구매랑 기타부자재 구매하기가 조금 힘들어서요ㅠㅠ 과일껍질따로 보내드리면 수고비 받으시고 오일 추출해서 받고싶어서요

아~~전혀 문제 없습니다~^^ㅎㅎ

@@TQSRE 답변 정말 감사합니다!! 혹시 희석할 때 시험관 믹서기 없이 직접 흔들어도 문제 없을까요? 시험관 믹서기 가격이 많이 비싸서 사기 번거롭네요..ㅠㅠ

@@이지-l4m ㅎㅎ네 그것 역시 없어도 됩니다. 마이크로피펫을 사용하신다면 그냥 피펫팅으로 섞으셔도 됩니다~^^

안녕하세요 음~~결과를 볼 수 없어 정확한 분석이 어렵네요ㅜㅜ 그냥 추출물에 항균작용을 하는 성분이 없다고 하기엔 좀 센 것들이라 ㅎㅎ 양성대조군과 음성대조군을 봐야 무엇이 잘못되었는지 감이라도 올텐데요 추출법이 잘못되어 유효성분이 파괴되었거나 너무 적거나 다양한 이유가 있을수도 있어요

음~~무슨 얘기인지 잘 이해가 안가네요~~^^; 다시 설명해 주시면 아는 대로 답변드리겠습니다 ㅎㅎ

네~ 안녕하세요~ 저희 동영상이 도움을 드렸다니 너무너무 기분이 좋네요~~ㅎㅎ 일단 벤질페록사이드와 에리스로마이신 둘 다 유기용매에 녹는 물질인 것이 핵심이네요~ 저도 비슷한 항생제인 클로람페니콜로 실험한 적이 있는데요. 생각보다 어려운 고민되는 실험은 아니에요. 일단 에탄올 10ml에 0.1g(가능하면0.01g)정도 녹입니다. 필터멸균 후 멸균된 증류수에 10배씩 희석하면 되지요~ 기본적으로 항생제 감수성을 알아보려는 물질들은 대부분 희석을 해야합니다. 원액이나 가루를 직접 사용할 경우 너무 강력한 탓이지요. 원액을 넣어 항균효과가 조금 나타났다면 그 용액은 항생물질로 사용하기 어려운거죠~~^^; 그리고 유기용매에 녹는 물질도 처음에 에탄올이나 메탄올에 녹이고 10배, 100배, 1000배 물로 희석시킨다면 에탄올이나 메탄올에 의한 항균력은 떨어지겠죠 혹시 걱정이 되면 아무것도 넣지 않은 에탄올을 10배 100배 희석해서 Negative control로 같이 실험해 보면 해결될 것으로 생각됩니다~~^^

ㅎㅎ 뭐 어려운 건 아닙니다 단순히 디스크페이퍼에 묻은 항생물질이 한천배지로 확산되는 원리이지요 디스크가 아닌 구멍을 뚫어 실험하는 well diffusion assay도 홈에 들어있는 항생물질이 한천배지로 확산되어 스며들어 그런 효과가 나타나는 것을 관찰하는 것입니다 단순히 구멍이나 디스크가 동그라니깐 동일하게 퍼져나가는 것을 관찰하는거죠 물질이 퍼졌는데 세균이 안죽었으면 효과가 없는거고 퍼져나간 자리에 세균이 번식하지 못했으면 효과가 있는거구요~^^

@@TQSRE 네 정말 감사합니다.. 진짜 죄송한데 제가 궁금한 것이 있어서 몇가지 질문을 드리고 싶어요 ㅎㅎ 1. 양성 대조군이 꼭 필요할까요? 음성대조군하고 천연 용액만으로 실험하면 결과가 부정확할까요? 2. 페이퍼 디스크에 용액을 접촉시킬 때 꼭 20um만 넣어야 하나요? 스포이드를 사용할건데 정확히 20um만 담는 것이 힘들 것 같아서요.. 스며드는 것이 20um니까 조금 더 초과해서 넣어도 20um만 스며들지 않을까 해서 질문드려요

@@bluesunboys6279 ㅎㅎ 죄송할게 있나요~^^ 1. 음~~일반적으로는 필요없다고 생각될테지만 만약 결과가 아무것도 안나온다면 무엇이 문제인지 알 수 있는 방법이 없는거죠. 혹시 세균에 문제가 있는 것인가? 배양하면서 뭔가 문제가 생긴 것인가? 등등에 대한 해답을 찾으려면 반드시 억제대를 형성하는 항생제와 같은 물질을 사용한 양성대조군이 필요한거죠. 반대로 다 잘나와서 뭔가 이상하다는 의문을 가질 때 항생물질들을 희석한 증류수 등을 의심해 볼 필요가 있죠 그럴 때 보통 음성대조군으로 희석에 사용된 증류수 등을 사용합니다. 증류수에서도 억제대가 형성되었다면~~ㅋㅋㅋ 뭔가 잘못된거죠~~ 2. 핵심은 변인통제입니다. 다 같은 양을 넣어야 하는 거죠~ 꼭 20㎕를 넣어야 하는 것이 아니라 모두 20㎕를 넣는 것이 중요합니다. 모두 100㎕를 넣어도 되지만 디스크마다 최대로 흡수할 수 있는 양이 정해져 있기 때문에 더 담지 못하는 거죠~그래서 대부분 디스크가 흡수할 수 있는 최대치를 넣는 것이 일반적입니다.

네~ 원래 1회용 플라스틱 도말봉은 포장지에서 꺼내 바로 사용하는 것입니다. 저는 아까워서 재사용하느라 알콜에 적시고 화염멸균을 하는 것입니다^^;

추가로 배양기가 없는 곳에서는 담요를 통해 따뜻하게 만든다면 어느정도 지나야 결과를 확인할 수 있을까요?

네 안녕하세요~ 답변해드리겠습니다~^^ 1) 항생물질이 어떤 것이지 모르기 때문에 제대로된 답변은 힘드네요^^; 제 생각에는 농도별로 희석한 것을 다 하는 것이 좋을 것 같습니다. 항생물질이 무엇인지, 어떻게 추출했는지 또 그 안에 유효한 물질이 얼마만큼 들어있는지 알 방법이 없기 때문에 2배씩 혹은 10배씩 희석하는 것을 추천합니다. 예를 들면 마늘을 착즙한 물질이다라고 했을 때에는 착즙이라는 과정상 상당히 농도가 진할 것이기 때문에 10배씩 추출해서 1000배 정도 까지 희석해서 각각 페이퍼디스크에 적셔 실험하는 것이죠. 아니면 감초를 우린 물이다 하면 아무래도 물에 많이 희석되어 있을 가능성이 있으므로 2배씩 희석해서 4배나 8배까지 희석하는 거죠. 뭔가 추출물을 농축한 가루를 대상으로 실험한다면 4000ppm, 2000ppm, 1000ppm, 500ppm 이렇게 희석하면 되구요. 2) 아~~항생제는 보통 100㎕/ml 정도 농도로 희석해서 사용합니다. 세균은 원래 흡광도로 O.D 값을 측정해서 일정한 농도로 맞춰 사용해야 하는데 학생들은 그러기 힘들 테니 그냥 일정한 농도로 좀 과한 양을 사용하는 것이 실험 결과가 더 잘 나올 것이라 생각합니다. 원래 일정한 농도로 세균을 희석해서 사용하는 이유는 여러 가지 물질을 대상으로 실험할 때 하루에 다 할 수 없기 때문에 다른 날 , 다른 시간, 어떤 때에 해도 일정한 농도로 실험하기 위한 일종의 변인통제라고 생각하시면 됩니다. 3) 이것 역시 변인통제인데요 4mm로 항상 일정하게 실험한다는 개념이죠. 더 두꺼우면 아무래도 깊숙하게 항생물질이 퍼질테니 지름은 오히려 줄어들 수 있죠. 반면 얇으면 항생물질이 얕게 침투할테니 억재대 지름이 더 넓어질 수 있죠^^

@@김민결-m2b보통 하루면 관찰이 가능합니다~!!

오! 감사합니다