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Hola Lizeth! Gracias por tu comentario! Es un gusto saber que el video fue de ayuda para ti! Cualquier cosa en la que pueda apoyar, no dudes en compartirla

Buenos días, gracias nuevamente por tu comentario. El SYBR GREEN es un agente intercalante, quiere decir que se une al DNA de cadena sencilla, por lo que cuando el DNA se encuentra en estado dsDNA se encuentra en su versión libre y no fluorescente. La unión del SYBR GREEN al DNA de cadena sencilla y a nucleótidos en síntesis y cuando se encuentra en su versión "binding" su configuración tridimensional le permite emitir fluorescencia. Espero que esta información sea útil Un saludo!

@@mantillam muchas gracias por tu tiempo, me quedo muy claro. Gracias :-)..Saludos desde Múnich /Alemania.

Buenos días, gracias por tus comentarios. En primera instancia, el uso de los diferentes genes como ORF1a, N, RdRp, N, entre otros debe ser anclado con la estrategia que se busque, algunos genes son de tamizaje de varios coronavirus como el gen E y otros ya son específicos del SARS-CoV-2 como N (si tiene un buen diseño de primers), RdRp, entre otros. Si el kit está apropiadamente usando primers específicos para SARS-CoV-2 el uso de E y N puede ser suficiente. Por otra parte, hay dos tipos de controles que se recomiendan: los controles positivos y negativos son reactivos que permiten confirmar que tu mastermix esté bien preparado funcione apropiadamente y no esté contaminada; por otra parte el llamado Control Interno es una diana adicional que se agrega al esquema como por ejemplo: E y N + RNAsaP, siendo este último un gen del ser humano y que al estar presente te garantiza que la muestra se encuentra en buen estado, fue extraída apropiadamente y esto es información que tienes en cada paciente. Hay otros esquemas (que yo prefiero no usar a veces) ya que se utilizan Controles Exógenos que básicamente es adicionar un fago o un plásmido a tu muestra para que acompañe la extracción, pero da reactividad si es una muestra de agua, una muestra degradada o una buena muestra.

Gracias por su comentario Alonso. Todo lo expresado en el comentario es real, por eso la estrategia para el diagnóstico de COVID y otros targets RNA utiliza un proceso previo llamado retrotranscripción, por esta razón las pruebas reciben un nombre completo de qRT-PCR. Este proceso se lleva a cabo por medio del uso de una enzima llamada transcriptasa reversa (normalmente generada por los retrovirus) que a partir de una molécula de RNA genera lo que se denomina un cDNA (complementary DNA). Una vez se genera el cDNA, el proceso de qPCR se puede realizar de manera regular Actualmente este proceso para que no implique dos pasos, se realiza por medio del uso de un modelo llamado one-step que comprende enzimas que realizan la retrotranscripción y el proceso regular en un solo paso

Gracias por tu comentario Marisol! Un afectuoso saludo, cualquier cosa en la que pueda ser útil, aquí estoy

Gracias Mijali! Cualquier cosa en la que podamos ser útiles, va a ser un gusto apoyar!